4 – ORIGINÁLNÍ MODELY ČLÁNKŮ, BIOLOGICKÉ
Antikoncepční účinek Uncaria tomentosa (kočičí dráp) u potkanů s experimentální endometriózou1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimentální
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow PhD degree, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP) and Unit of Endometriosis and Surgical Laboratory, HU-UFMA, Maranhao, Brazil. Navrhl protokol zahrnující technické postupy, odpovědný za psaní rukopisů, odpovědný za intelektuální a vědecký obsah studie, dohlížel na všechny fáze studie, poskytoval pokyny pro chirurgický zákrok
Student IIgradu, Federální univerzita v Maranhau (UFMA) , Brazílie. Podílí se na technických postupech odpovědných za přípravu rukopisů
IIIMD, Patologické oddělení, HU-UFMA, Maranhao, Brazílie. Makroskopická a histopatologická vyšetření
IVPhD, partnerský profesor, UNIFESP, Sao Paulo a vedoucí oddělení bolesti pánve a endometriózy Lékařské fakulty Paulista (EPM-UNIFESP) v Brazílii. Odpovídá za získávání a interpretaci dat, pomáhá s technickými postupy a poskytuje pokyny pro chirurgické zákroky.
Korespondence
ABSTRAKT
ÚČEL: Vyhodnoťte histologické změny v parenchymu Epiteliální vrstva dělohy a vaječníků potkanů s indukovanou endometriózou, ošetřená extraktem Uncaria tomentosa.
METODY: Bylo vybráno 29 krys s experimentální endometriózou a rozděleno do tří skupin: Skupina uncaria dostávala 32 mg / ml extraktu Uncaria tomentosa, 1 ml podávaného denně a skupina s placebem dostávala 1 ml fyziologického roztoku 0,9% denně, po dobu 14 dny (obě skupiny); leuprolidová skupina dostávala leuprolidacetát 1 mg / kg tělesné hmotnosti aplikovaný v jedné subkutánní dávce. V 15. den léčby byl děložní roh a vaječníky odstraněny pro histopatologickou analýzu.
VÝSLEDKY: Skupina s nekarií předvedla devět vzorků (90%) s nezralými ovariálními folikuly, zatímco skupina s placebem neprojevila žádný případ a ve skupině s leuprolidem bylo osm krys (88%) se stejnou změnou. Skupina s placebem vykazovala zralé žluté tělísko u všech zvířat, méně často se vyskytovala ve skupinách uncaria (10%) a leuprolid (22%). Děložní epitel vykazoval slabou proliferaci u devíti (90%) vzorků skupiny uncaria, u dvou (20%) zvířat ve skupině s placebem a sedmi (77,8%) potkanů ve skupině s leuprolidem.
ZÁVĚRY: Zjištění naznačují, že Uncaria tomentosa má antikoncepční účinek.
Klíčová slova: Endometrióza. Fytoterapie. Antikoncepce. Potkani.
RESUMO
OBJETIVO: Hodnocení histológie pro útěk z ovariánského ovčího kříže s endometriózní induzidní tratě s extrato z Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimentální formáty três grupos: O uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso desátník aplicado pomocí podkožní dávky única. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
VÝSLEDKY: Grupo uncaria a presentou nove amostras (90%) com maturação nekompleta dos folikulos ovarianos, já o grupo placebo não a presentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo a presentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Úvod
Endometrióza je onemocnění charakterizované přítomností tkáně, která je strukturálně a funkčně podobná tkáni endometria mimo děložní dutinu, což ovlivňuje kvalitu života a reprodukční schopnost kapacita pacientů. Obvykle se vyvíjí v pánevních orgánech, jako jsou pobřišnice, vaječníky, vejcovody, děloha a fornix Douglas1,2.
Výskyt endometriózy je až kolem 10% žen v reprodukčním věku. Tato patologie se chová jako onemocnění reagující na estrogen se zánětlivými a imunomodulačními aktivitami, stejně jako nerovnováha buněčné apoptózy a oxidačního stresu2-5.
Léčba endometriózy může být chirurgická nebo klinická, jejíž obvyklá medikační terapie je terapie, která interferuje s normálním menstruačním cyklem a vyvolává pseudo těhotenství, pseudomenopauzu nebo chronickou anovulaci a poskytuje klinické zlepšení. Jeho účinky však nejsou léčivé, s častými opakováními, které ospravedlňují hledání nových způsobů léčby6.
Uncaria tomentosa, populárně známá jako kočičí dráp, patří do čeledi Rubiaceae, běžně se vyskytující v tropických oblastech Jižní a Střední Amerika. Tato rostlina ve formě extraktu je široce používána domorodými obyvateli a často se používá jako alternativní léčba různých nemocí. Studie prokázaly, že kočičí dráp má protizánětlivé, imunomodulační, pro-apoptotické a antioxidační, stejně jako antikoncepční účinek, k ospravedlnění možné alternativy k léčbě endometriózy7,8.
Cílem této studie bylo vyhodnotit histologické změny v epiteliální vrstvě dělohy parenchymu a vaječníky potkanů s indukovanou endometriózou, ošetřené vodným extraktem Uncaria tomentosa (kočičí dráp).
Metody
Tato experimentální studie byla dokončena v období od dubna do května 2011, na vzorku 40 krys Wistar (Rattus norvegicus albinos) dospělých, samic, panenský, vážící mezi 180 a 250 gramy, s věkem 60 dní, poskytovaný Bioteriem Federální univerzity v Maranhãu (UFMA).
Tento výzkum byl prováděn v Laboratoři experimentální chirurgie Fakultní nemocnice Federální univerzita v Maranhão. Řídilo se brazilskou legislativou pro používání pokusných zvířat (zákon Arouca č. 11 794/2008) a standardy stanovenými brazilskou vysokou školou experimentů se zvířaty (COBEA), institucí přidruženou k Mezinárodní radě pro vědu o laboratorních zvířatech. Studie byla schválena Etickou komisí pro experimentování na zvířatech (CEEA-UEMA) pod číslem protokolu 011/2011.
Zvířata byla seskupena po pěti na polypropylenovou klec s krytem z nerezové oceli o rozměrech 46 cm x 31 cm x 16 cm s dnem pokrytým dřevěnými hoblinami, měněno každých 48 hodin. Zvířata byla chována za konstantních podmínek prostředí, dostávala krmení pro potkany (Purina®, São Paulo, Brazílie) a vodu ad libitum sedm dní pro adaptaci, s kontrolou hluku, teplotou 22 ° C ± 2 ° C, relativní vlhkostí 40% 60%, 12/12 hodinový cyklus světlo / tma.
Indukce endometriózy byla provedena podle metodiky navržené Nogueirou Neto et al. 9. Po 21 dnech od prvního chirurgického zákroku potkani podstoupili další chirurgický zákrok a poté byla provedena inventura peritoneální dutiny s identifikací a měřením autotransplantačního fokusu pomocí digitálního pachymetru, následovaný výpočtem objemu pomocí systému pro klasifikaci stupňů Růstové implantáty v souladu s Quereda et al. 10. Ve studii zůstali pouze ti, u kterých se vyvinula úroveň růstu dva a tři.
Krysy byly náhodně rozděleny do tří skupin. Každé zvíře bylo označeno na ocasu permanentním kartáčem o průměru 4 mm (Pilot®, São Paulo, Brazílie) a byly identifikovány klece. Začátek sondy byl od 22. pooperačního dne indukce endometriózy.
Skupiny byly rozděleny následovně: skupině Uncaria byla podávána sondou 32 mg / ml extraktu Uncaria tomentosa (Cat’s Claw 100mg, Herbarium of Brazílie), podávané 1 ml denně, a placebo skupina dostávala denní sondu s 1 ml 0,9% fyziologického roztoku, oba po dobu 14 dnů podle Nogueira Neto a kol. 9. Skupina leuprolid dostávala leuprolid acetát 1 mg / kg tělesné hmotnosti (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT z Brazílie) jedna subkutánní dávka11.
Experimentální léčivo se skládá ze 16 g extraktu z kočičích drápů (Uncaria tomentosa) a 500 ml 0,9% solného roztoku. Zpracování bylo provedeno mletím 160 tablet po 100 mg extraktu z kočičích drápů (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) v porcelánové třecí misce s tloučkem a poté k jeho rozpuštění v 500 ml 0,9% NaCl v kádince promíchejte do hladka. Směs byla vyrobena v průměrném čase 15 minut a celkový objem byl 500 ml v suspenzi s koncentrací 32 mg / ml9.
Po ukončení léčby byl proveden nový chirurgický zákrok a v této době byla znovu provedena inventura peritoneální dutiny. Zbývající pravý roh dělohy a oba vaječníky byly odstraněny pro histologické hodnocení. Odstraněné části byly vyčištěny 0,9% solným roztokem a uloženy v nádobě s 10% pufrovaným formalinem, obdržením identifikace a odeslány na patologické oddělení Fakultní nemocnice Federální univerzity v Maranhão. Byly vytvořeny tkáňové řezy a obarveny hematoxylin-eosinem (HE).
Zvířata v každé skupině byla usmrcena 15. den po začátku léčby. Po hmotnosti jim bylo podáno 150 mg / kg thiopentalu sodného (Thiopental®, Crystal, St. Paul) intraperitoneálním podáním.Lék byl zředěn stejným objemem solného roztoku, podle rezoluce číslo 714, 20. června 2002, Federální rada pro veterinární medicínu (CFMV). Smrt byla charakterizována kardiorespirační zástavou a úplnou absencí reflexů.
Analýza dat byla popisná na základě histologických nálezů podle Mukherji a Bhowmik12.
Výsledky
Z počátečního vzorku 40 potkanů bylo vyloučeno deset, že se u nich nevyvinul stupeň endometriózy dva a tři, a jeden kvůli aspiraci během sondy. Konečný vzorek byl složen pro 29 potkanů a byl rozdělen do tří skupin: uncaria a placebo, obě s deseti zvířaty; a leuprolidová skupina s devíti krysami.
Skupina podstupující léčbu Uncaria tomentosa (skupina Uncaria) odhalila nezralé folikuly (tabulka 1 a obrázek 1) v devíti případech (90%) a folikuly s úplným zráním a zralým corpus luteum (tabulka 2) je přítomna v jednom případě (10%).
Histologie dělohy (tabulka 3) vykazovala slabě proliferativní endometrium (obrázek 2) v devíti vzorcích (90 %).
placebo skupina měla ve všech případech folikuly s úplným zráním a zralým žlutým tělem (100%). Ve vztahu k endometriu byl proliferativní v osmi případech (80%).
Skupina s leuprolidem měla nezralé folikuly ve všech vzorcích a atrofovaný corpus luteum v osmi vzorcích (88%). Endometrium bylo atrofováno (obrázek 3) ve dvou případech (22,2%) a slabě proliferativní v sedmi případech (77,8%).
Diskuse
Studie s klinickými a experimentálními údaji o použití léčivých bylin k léčbě endometriózy uvádějí, že v boji proti této nemoci je účinných několik léků s protizánětlivými, analgetickými, imunomodulačními a antioxidačními vlastnostmi. Pro léčbu endometriózy u žen jsou nezbytné nové klinické studie týkající se účinnosti bylin13. V tomto smyslu průvodce důkazy pro diagnostiku a léčbu endometriózy prováděnou Evropskou společností pro lidskou reprodukci a embryologii zváží doporučený stupeň stupně D pro použití léčivých bylin při léčbě endometriózy, to znamená, že neexistují žádné důkazy k podpoře této léčby, ale tato společnost doporučuje, aby se rostlinné léky nevyhazovaly, protože u některých žen, které používaly tuto bylinu, bylo zaznamenáno snížení bolesti a zlepšení kvality života. Kromě toho máme skutečnost, že kočičí dráp již povolil jeho použití institucemi, jako je FDA (Food and Drug Administration) jako doplněk stravy.
Znalosti o endometrióze o fyziopatologii se zánětlivými změnami, apoptotické , imunomodulační a antioxidační, dal základ experimentálnímu užívání léků, které mají akční mechanismy s nepříznivými účinky výše zmíněných změn. Experimentální studie používající tento extrakt prokázala významné snížení endometriálního zaměření9.
Jakmile bylo zjištěno, že kočičí dráp experimentálně snižuje endometriózu, je nutné vyhodnotit akční mechanismus Uncaria tomentosa pro léčbu této patologie. Mezi léky, které se běžně používají k léčbě endometriózy, patří antikoncepce se známým účinkem proti endometrióze. Při hodnocení in vitro kultivace prsní nádorové tkáně (infiltrující duktální karcinom, stupeň II a špatně diferencovaný) byla použita Uncaria tomentosa a ve srovnání s methotrexátem, kde bylo pozorováno snížení specifické oblasti estrogenových receptorů způsobené tímto rostlinným léčivem, které připisuje antikoncepční účinek na Uncaria tomentosa 15. Na základě této premisy je nutné vyhodnotit antikoncepční účinek kočičích drápů.
Histologický parametr zvolený pro hodnocení antikoncepčních účinků byl proveden na základě studie, která zkoumala použití intramuskulárního medroxy-progesteronu u potkanů v různých dávkách, následovaná histologickou analýzou vaječníků a epiteliální vrstvy dělohy 12. Byly rozděleny do tří skupin, experimentální, pozitivní a negativní kontroly. Experimentální skupina (skupina Uncaria) využila 32mg / den extraktu Uncaria tomentosa a negativní kontrolní skupina (skupina placeba) použila denně 1 ml fyziologického roztoku 0,9% na základě Neto e t al.9, který vykazoval významné snížení endometriózy bez zjevných klinických komplikací. Pozitivní kontrolní skupina (skupina s leuprolidem) obdržela leuprolid-acetát v dávce 1 mg / kg tělesné hmotnosti aplikovanou v jedné subkutánní dávce na základě testu Oktem et al. 11, který s uspokojivými výsledky vyhodnotil použití vysoké dávky atorvastatinu na experimentální endometriózu11. Leuprolidacetát je analog GnRH, který má vynikající výsledky u žen s endometriózou, ale má omezené použití kvůli vedlejším účinkům, které se vyznačují hlavně úbytkem kostní hmoty a klimakterickými potížemi14.
Histologická analýza vaječníků ukázala podobné změny ve skupinách nekarií a leuprolidů, což ukazuje na absenci atrofie žlutého tělíska a primárních ovariálních folikulů ve většině vzorků, což naznačuje absenci aktivity vaječníků. Při histologickém vyhodnocení epiteliální vrstvy dělohy se skupiny Uncaria a leuprolid opět ukázaly podobně, jejich vzorky vykazovaly slabě proliferativní epiteliální vrstvy, na rozdíl od těch, které byly pozorovány ve skupině s placebem u všech jejich vzorků v proliferativní fázi. Tyto údaje podle Mukherjiho a Bhowmik12 jsou kompatibilní s antikoncepcí.
Závěr
Vzhledem k histopatologickým nálezům u potkanů s experimentální endometriózou vystavených extraktu z Uncaria tomentosa a ve srovnání s pozitivní a negativní kontrolou skupiny, doporučujeme, aby nalezené změny byly kompatibilní s antikoncepcí.
1. Sampson J. Peritoneální endometrióza způsobená menstruačním rozšířením endometriální tkáně do peritoneální dutiny. Jsem J. Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Indukce peritoneální endometriózy u nahých myší s použitím lidských imortalizovaných epiteliálních a stromálních buněk endometriózy: potenciální experimentální nástroj ke studiu molekulární patogeneze endometriózy u lidí. Plod Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Vztah mezi apoptózou a počtem makrofágů v eutopickém endometriu u žen s endometriózou i bez ní. Plod Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Léčba endometriózy. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K. Změny ve struktuře chromozomu, mitotické aktivitě a obsahu jaderné DNA z buněk Allium Test vyvolaný extraktem z kůry vody z Uncaria tomentosa (Wild ) DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Experimentální snížení endometriózy u potkanů léčených extraktem Uncaria tomentosa (kočičí dráp). Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Individuální a kombinované účinky triptorelinu a gestrinonu na experimentální endometriózu u potkanů. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 12.
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologické změny ve vaječníku a děloze potkana po injekční antikoncepční terapii. Antikoncepce. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Vyčerpání specifických vazebných stránek pro estrogenový receptor Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Střet zájmů: žádný
Finanční zdroj: žádný