Úvod
Transformace je proces zavádění cizí DNA (např. plazmidů, BAC) do bakterie. Bakteriální buňky, do kterých lze transformovat cizí DNA, se nazývají kompetentní. Některé bakterie jsou přirozeně kompetentní (např. B. subtilis), zatímco jiné, jako je E. coli, nejsou přirozeně kompetentní. Nekompetentní buňky lze učinit kompetentními a poté transformovat pomocí jednoho ze dvou hlavních přístupů; chemická transformace a elektroporace.
Obě transformační metody mají své výhody i nevýhody. Obecně platí, že chemická transformace je méně náchylná k chybám a rychlejší, avšak elektroporace produkuje vyšší účinnost transformace (zlomek transformovaných buněk, které ve skutečnosti absorbují cizí DNA). Podrobnější diskuse o obou přístupech najdete v části Klonování.
Protokoly
OpenWetWare již má řadu protokolů týkajících se bakteriální transformace, ale další jsou vždy vítány.
Pokud používáte variantu na jednom z těchto protokolů, můžete přidat odkaz na svůj protokol z jedné z těchto stránek, aby ostatní uživatelé mohli najít protokol, který pro ně funguje. Pokud navíc někdo používá vysoce účinné protokoly Innoe nebo Hanahan, pak sem přidejte protokoly.
Chemická transformace
Pokud plánujete provést chemickou transformaci, měli byste vidět tyto stránky –
- Příprava chemicky kompetentních buněk
- Příprava pufru TSS
- Transformace chemicky kompetentních buněk
- Příprava chemicky kompetentních buněk (Inoue )
- Transformace chemicky kompetentních buněk (Inoue)
- TOP10 chemicky kompetentních buněk
Porovnání chemického transformačního pufru
Někdo by měl podívejte se na nároky Nishimura90. tk 08:58, 25. září 2007 (EDT)
Protokol transformace chloridu rubidného zde
Někdo by měl zkontrolovat tvrzení o chemické způsobilosti 1e10 pomocí protokolů 10% ethanolu a chloridu vápenatého zde.
Elektroporace
Pokud plánujete použití elektroporace, podívejte se na tyto stránky –
- Elektrokompetentní články
- Elektroporace
Všechny abstrakty Medline: PubMed | HubMed