4 – ORIGINAL ARTIKELMODELLE, BIOLOGISCH
Empfängnisverhütende Wirkung von Uncaria tomentosa (Katzenkralle) bei Ratten mit experimenteller Endometriose1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unh-de-gato) em ratas com endometriose experimentell
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura Rodrigues II; Mariana Santana Xavier II; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow PhD-Abschluss, Bundesuniversität von Sao Paulo (UNIFESP) und Abteilung für Endometriose und chirurgisches Labor, HU-UFMA, Maranhao, Brasilien. Entwickelte das Protokoll, das mit technischen Verfahren verbunden war, für das Verfassen von Manuskripten verantwortlich war, für den intellektuellen und wissenschaftlichen Inhalt der Studie verantwortlich war, überwachte alle Phasen der Studie und lieferte Richtlinien für den chirurgischen Eingriff.
IIGraduate Student, Federal University of Maranhao (UFMA) , Brasilien. Beteiligt an technischen Verfahren, verantwortlich für die Manuskripterstellung
IIIMD, Abteilung Pathologie, HU-UFMA, Maranhao, Brasilien. Makroskopische und histopathologische Untersuchungen
IVPhD, außerordentlicher Professor, UNIFESP, Sao Paulo und Leiter der Abteilung für Beckenschmerzen und Endometriose der Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brasilien. Verantwortlich für die Erfassung und Interpretation von Daten, unterstützt bei technischen Verfahren, Richtlinien für die chirurgischen Eingriffe
Korrespondenz
ZUSAMMENFASSUNG
ZWECK: Bewertung der histologischen Veränderungen im Parenchym Epithelschicht der Gebärmutter und des Eierstocks von Ratten mit induzierter Endometriose, behandelt mit Uncaria tomentosa-Extrakt.
METHODEN: 29 Ratten mit experimenteller Endometriose wurden ausgewählt und in drei Gruppen eingeteilt: Die Uncaria-Gruppe erhielt 32 mg / ml Uncaria tomentosa-Extrakt, 1 ml täglich verabreicht, und die Placebo-Gruppe erhielt 1 ml Kochsalzlösung 0,9% pro Tag während 14 Jahren Tage (beide Gruppen); Die Leuprolidgruppe erhielt Leuprolidacetat 1 mg / kg Körpergewicht in einer subkutanen Einzeldosis. Am 15. Behandlungstag wurden das Uterushorn und die Eierstöcke zur histopathologischen Analyse entfernt.
ERGEBNISSE: Die Uncaria-Gruppe präsentierte neun Proben (90%) mit unreifen Ovarialfollikeln, während die Placebo-Gruppe keinen Fall aufwies und in der Leuprolid-Gruppe acht Ratten (88%) mit der gleichen Veränderung vorkamen. Die Placebogruppe zeigte bei allen Tieren ein reifes Corpus luteum, das in Uncaria- (10%) und Leuprolid- (22%) Gruppen weniger häufig auftrat. Das Uterusepithel zeigte in neun (90%) Proben der Uncaria-Gruppe, bei zwei (20%) Tieren in der Placebo-Gruppe und sieben (77,8%) Ratten in der Leuprolid-Gruppe eine schwache Proliferationsrate.
SCHLUSSFOLGERUNGEN: Die Ergebnisse legen nahe, dass Uncaria tomentosa eine empfängnisverhütende Wirkung hat.
Schlüsselwörter: Endometriose. Phytotherapie. Empfängnisverhütung. Ratten.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimentelle e formados três grupos: O grupo uncaria Recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32 mg / ml, Administrado 1 ml ao dia eo grupo Placebo Recebeu 1 ml de solução salina a 0,9%, ambos 14 Dias; o Grupo Leuprolida Recebeu Acetato de Leuprolida 1 mg / kg Peso Corporal Aplicado über Subcutânea Dosis única. Nr. 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
ERGEBNISSE: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com reifende unvollständige Dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
SCHLUSSFOLGERUNG: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Einleitung
Endometriose ist eine Krankheit, die durch das Vorhandensein von Gewebe gekennzeichnet ist, das strukturell und funktionell dem Endometriumgewebe außerhalb der Gebärmutterhöhle ähnlich ist und die Lebensqualität und Fortpflanzungsfähigkeit beeinträchtigt Kapazität der Patienten. Entwickelt sich normalerweise in den Beckenorganen wie Peritoneum, Eierstöcken, Eileitern, Gebärmutter und Fornix Douglas1,2.
Die Inzidenz von Endometriose liegt bei etwa 10% der Frauen im reproduktiven Alter. Diese Pathologie verhält sich wie eine auf Östrogen reagierende Krankheit mit entzündlichen und immunmodulatorischen Aktivitäten sowie einem Ungleichgewicht von zellulärer Apoptose und oxidativem Stress2-5.
Die Behandlung der Endometriose kann chirurgisch oder klinisch erfolgen, wobei die übliche medikamentöse Therapie den normalen Menstruationszyklus stört und Pseudopregnanz, Pseudomenopause oder chronische Anovulation induziert, was zu einer klinischen Verbesserung führt. Seine Wirkungen sind jedoch nicht heilend, mit häufigen Rezidiven, die die Suche nach neuen Behandlungen rechtfertigen6.
Die Uncaria tomentosa, im Volksmund als Katzenkralle bekannt, gehört zur Familie der Rubiaceae, die häufig in tropischen Gebieten von vorkommt Süd- und Mittelamerika. Diese Pflanze in Form eines Extrakts wird häufig von Indigenen verwendet und häufig als alternative Behandlung für verschiedene Krankheiten verwendet. Studien haben gezeigt, dass Katzenkrallen entzündungshemmend, immunmodulatorisch und proapoptotisch sind und Antioxidans sowie kontrazeptive Wirkung, um eine mögliche Alternative zur Behandlung der Endometriose zu rechtfertigen7,8.
Ziel dieser Studie war es, die histologischen Veränderungen in der Epithelschicht des Parenchyms der Gebärmutter und zu bewerten Eierstock von Ratten mit induzierter Endometriose, behandelt mit wässrigem Extrakt von Uncaria tomentosa (Katzenkralle).
Methoden
Diese experimentelle Studie wurde zwischen April und Mai 2011 mit einer Probe von abgeschlossen 40 Wistar-Ratten (Rattus norvegicus albinos) erwachsen, weiblich, Jungfrau mit einem Gewicht zwischen 180 und 250 Gramm und einem Alter von 60 Tagen, bereitgestellt vom Bioterium der Bundesuniversität Maranhão (UFMA).
Diese Forschung wurde im Labor für experimentelle Chirurgie des Universitätsklinikums der Universität durchgeführt Bundesuniversität von Maranhão. Es folgte der brasilianischen Gesetzgebung für die Verwendung von Versuchstieren (Arouca-Gesetz Nr. 11.794 / 2008) und den Standards des brasilianischen College für Tierversuche (COBEA), einer Einrichtung, die dem Internationalen Rat für Labortierwissenschaften angeschlossen ist. Die Studie wurde von der Ethikkommission für Tierversuche (CEEA-UEMA) unter der Protokollnummer 011/2011 genehmigt.
Die Tiere wurden zu fünf pro Polypropylenkäfig mit einer Grillabdeckung aus rostfreiem Stahl mit einer Größe von 46 cm x 31 cm x gruppiert 16 cm mit dem Boden mit Holzspänen bedeckt, alle 48 Stunden gewechselt. Die Tiere wurden unter konstanten Umgebungsbedingungen gehalten und erhielten sieben Tage lang Rattenfutter (Purina®, São Paulo, Brasilien) und Wasser ad libitum zur Anpassung mit Lärmschutz, Temperatur 22 ° C ± 2 ° C, relative Luftfeuchtigkeit 40% 60%, 12/12 Stunden Hell / Dunkel-Zyklus.
Die Induktion der Endometriose wurde gemäß der von Nogueira Neto et al.9 vorgeschlagenen Methodik durchgeführt. Nach 21 Tagen seit der ersten Operation wurden die Ratten erneut operiert. Zu diesem Zeitpunkt wurde die Bestandsaufnahme der Bauchhöhle mit Identifizierung und Messung des Autotransplantationsfokus mit einem digitalen Pachymeter durchgeführt, gefolgt von der Berechnung des Volumens unter Verwendung des Gradklassifizierungssystems von Wachstumsimplantate nach Quereda et al.10. Nur diejenigen, die ein Wachstumsniveau von zwei und drei entwickelt haben, blieben in der Studie.
Die Ratten wurden zufällig in drei Gruppen eingeteilt. Jedes Tier wurde mit einer 4 mm Permanentbürste (Pilot®, São Paulo, Brasilien) am Schwanz markiert und die Käfige identifiziert. Der Beginn der Sonde erfolgte ab dem 22. postoperativen Tag der Endometriose-Induktion.
Die Gruppen wurden wie folgt aufgeteilt: Gruppe Uncaria erhielt eine Sonde mit 32 mg / ml Uncaria tomentosa-Extrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brasilien), verabreicht 1 ml pro Tag, und die Placebogruppe erhielt eine tägliche Sonde mit 1 ml Kochsalzlösung 0,9%, beide für 14 Tage gemäß Nogueira Neto et al.9. Die Gruppe Leuprolid erhielt Leuprolidacetat 1 mg / kg Körpergewicht (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT aus Brasilien) subkutane Einzeldosis11.
Das experimentelle Arzneimittel besteht aus 16 g Katzenklauenextrakt (Uncaria tomentosa) und 500 ml 0,9% iger Kochsalzlösung. Die Verarbeitung erfolgte durch Mahlen von 160 Tabletten mit 100 mg Katzenklauenextrakt (Katzenklaue 100 mg, Herbarium von Brasilien) in einem Porzellanmörser mit einem Stößel und anschließendes Auflösen in 500 ml 0,9% NaCl in einem Becherglas glatt rühren. Die Mischung wurde in einer durchschnittlichen Zeit von 15 Minuten hergestellt und das Gesamtvolumen betrug 500 ml in Suspension mit einer Konzentration von 32 mg / ml9. Nach dem Ende der Behandlung wurde eine neue Operation durchgeführt und zu diesem Zeitpunkt wurde die Bestandsaufnahme der Bauchhöhle erneut durchgeführt. Das verbleibende rechte Uterushorn und beide Eierstöcke wurden zur histologischen Bewertung entfernt. Die entfernten Teile wurden mit 0,9% iger Salzlösung gereinigt und in einem Behälter mit 10% gepuffertem Formalin gelagert, identifiziert und an die Pathologieabteilung des Universitätsklinikums der Bundesuniversität Maranhão weitergeleitet. Gewebeschnitte wurden hergestellt und mit Hämatoxylin-Eosin (HE) angefärbt. Die Tiere in jeder Gruppe wurden am 15. Tag nach Beginn der Behandlung getötet. Nach dem Gewicht wurden ihnen durch intraperitoneale Verabreichung 150 mg / kg Natriumthiopental (Thiopental®, Crystal, St. Paul) verabreicht.Das Medikament wurde gemäß Resolution 714 vom 20. Juni 2002, Bundesrat für Veterinärmedizin (CFMV), in gleichem Volumen Kochsalzlösung verdünnt. Der Tod war durch einen Herzstillstand und das völlige Fehlen von Reflexen gekennzeichnet.
Die Datenanalyse war auf der Grundlage der histologischen Befunde nach Mukherji und Bhowmik12 beschreibend.
Ergebnisse
Aus der Ausgangsprobe von 40 Ratten wurden zehn ausgeschlossen, weil sie keine Endometriose der Klassen zwei und drei entwickelten, und eine aufgrund von Aspiration während der Sonde. Die endgültige Probe wurde für 29 Ratten zusammengestellt und in drei Gruppen eingeteilt: Uncaria und Placebo, beide mit zehn Tieren; und Leuprolidgruppe mit neun Ratten.
Die Gruppe, die mit Uncaria tomentosa (Uncaria-Gruppe) behandelt wurde, zeigte in neun Fällen (90%) unreife Follikel (Tabelle 1 und 1) und die Follikel mit voller Reifung und Reife In einem Fall (10%) liegt Corpus luteum (Tabelle 2) vor.
Die Uterushistologie (Tabelle 3) zeigte in neun Proben (90) ein schwach proliferatives Endometrium (Abbildung 2) %).
Das Placebo Die Gruppe hatte in allen Fällen Follikel mit voller Reifung und reifem Corpus luteum (100%). In Bezug auf das Endometrium war es in acht Fällen (80%) proliferativ.
Die Leuprolidgruppe hatte in allen Proben unreife Follikel und in acht Proben atrophiertes Corpus luteum (88%). Das Endometrium war in zwei Fällen (22,2%) atrophiert (3) und in sieben Fällen (77,8%) schwach proliferativ.
Diskussion
Studien mit klinischen und experimentellen Daten zur Verwendung von Heilkräutern zur Behandlung von Endometriose haben gezeigt, dass mehrere Medikamente mit entzündungshemmenden, analgetischen, immunmodulatorischen und antioxidativen Eigenschaften bei der Bekämpfung dieser Krankheit wirksam sind. Für die Behandlung der Endometriose bei Frauen sind neue klinische Studien zur Wirksamkeit von Kräutern erforderlich13. In diesem Sinne wird im Evidenzleitfaden für die Endometriose-Diagnose und -Behandlung der Europäischen Gesellschaft für menschliche Reproduktion und Embryologie ein Empfehlungsgrad Grad D für die Verwendung von Heilkräutern bei der Behandlung von Endometriose berücksichtigt, dh es gibt keine Evidenz Um diese Behandlungen zu unterstützen, empfiehlt diese Gesellschaft jedoch, pflanzliche Arzneimittel nicht zu verwerfen, da bei einigen Frauen, die diese Kräuter verwendeten, eine Verringerung der Schmerzen und eine Verbesserung der Lebensqualität festgestellt wurde. Darüber hinaus haben wir die Tatsache, dass Katzenkralle bereits die Verwendung durch Institutionen wie die FDA (Food and Drug Administration) als Nahrungsergänzungsmittel genehmigt hat.
Das Wissen über Endometriose über Physiopathologie mit entzündlichen Veränderungen, apoptotisch , immunmodulatorisch und antioxidativ, gab die Grundlage für die experimentelle Verwendung von Arzneimitteln, die Wirkmechanismen mit nachteiligen Auswirkungen dieser oben genannten Veränderungen besitzen. Eine experimentelle Studie unter Verwendung dieses Extrakts zeigte eine signifikante Verringerung des Endometriumfokus9.
Katzenkralle reduziert die Endometriose experimentell, es ist notwendig, den Uncaria tomentosa-Wirkmechanismus für die Behandlung dieser Pathologie zu bewerten. Zu den üblicherweise zur Behandlung von Endometriose verwendeten Arzneimitteln gehören die Verhütungsmittel mit bekannter Wirkung gegen Endometriose. Bei der Bewertung der In-vitro-Kultur des Brusttumorgewebes (infiltrierendes Duktalkarzinom, Stadium II und schlecht differenziert) wurde Uncaria tomentosa verwendet und mit Methotrexat verglichen, wo eine Abnahme des spezifischen Bereichs der Östrogenrezeptoren beobachtet wurde, die durch dieses pflanzliche Arzneimittel verursacht wurde eine empfängnisverhütende Wirkung gegen Uncaria tomentosa 15. Basierend auf dieser Prämisse ist es notwendig geworden, die empfängnisverhütende Wirkung der Katzenklaue zu bewerten.
Der histologische Parameter, der zur Bewertung der empfängnisverhütenden Wirkungen ausgewählt wurde, wurde auf der Grundlage einer untersuchten Studie ermittelt die Verwendung von intramuskulärem Medroxyprogesteron bei Ratten mit unterschiedlichen Dosen, gefolgt von einer histologischen Analyse der Eierstöcke und der Uterusepithelschicht der Probe12. Sie wurden in drei Gruppen unterteilt, experimentelle, positive und negative Kontrollen. Die experimentelle Gruppe (Uncaria-Gruppe) machte Gebrauch 32 mg / Tag Uncaria tomentosa-Extrakt und die negative Kontrollgruppe (Placebo-Gruppe) verwendeten täglich 1 ml Kochsalzlösung 0,9%, bezogen auf Neto e t al.9, die eine signifikante Reduktion der Endometriose zeigten, ohne dass klinische Komplikationen erkennbar waren. Die positive Kontrollgruppe (Leuprolidgruppe) erhielt Leuprolidacetat 1 mg / kg Körpergewicht, angewendet auf eine subkutane Einzeldosis, basierend auf Oktem et al.11, die die Verwendung einer hohen Atorvastatin-Dosis bei experimenteller Endometriose mit zufriedenstellenden Ergebnissen bewertete11. Das Leuprolidacetat ist ein GnRH-Analogon, das bei Frauen mit Endometriose hervorragende Ergebnisse erzielt, jedoch aufgrund von Nebenwirkungen, die hauptsächlich durch Knochenschwund und klimakterische Beschwerden gekennzeichnet sind, nur begrenzt eingesetzt werden kann14.
Die histologische Analyse der Eierstöcke zeigte ähnliche Veränderungen der Uncaria- und Leuprolidgruppen und zeigte in den meisten Proben eine fehlende Atrophie des Corpus luteum und der primären Ovarialfollikel, was auf das Fehlen einer Ovarialaktivität hinweist. Bei der histologischen Bewertung der Uterusepithelschicht zeigten die Uncaria- und Leuprolidgruppen erneut eine ähnliche Leistung, wobei ihre Proben schwach proliferative Epithelschichten zeigten, im Gegensatz zu denen, die in der Placebogruppe mit all ihren Proben in der proliferativen Phase beobachtet wurden. Diese Daten nach Mukherji und Bhowmik12 sind mit der Empfängnisverhütung vereinbar.
Schlussfolgerung
Berücksichtigung der histopathologischen Befunde bei Ratten mit experimenteller Endometriose, die dem Extrakt von Uncaria tomentosa ausgesetzt und mit der Positiv- und Negativkontrolle verglichen wurden Gruppen schlagen wir vor, dass die gefundenen Änderungen mit der Empfängnisverhütung kompatibel sind.
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Interessenkonflikt: keine
Finanzquelle: keine