Kromosomimaalaus tai fluoresenssihybridisaatio (FISH) – Radiation Effects Research Foundation (RERF)

Tämä tekniikka on kehitetty 1980-luvun lopulla ja on tehokas menetelmä havaita translokaatiot (uudelleenjärjestelyt kromosomien välillä).

FISH: n kehittämiseksi oli tarpeen eristää kukin ihmisen kromosomi. Myöhemmin näiden kromosomien DNA fragmentoitiin ja laitettiin bakteerisoluihin sen monistamiseksi (tuottamaan monia kopioita). Tällä tavalla voidaan saada suuri määrä DNA-kopioita kustakin kromosomista.

Nämä monistetut DNA-fragmentit leimataan sopivilla fluoresoivilla (valoa emittoivilla) väriaineilla ja niiden annetaan hybridisoitua (kiinnittyä) metafaasikromosomeihin. . Fluoresoivat leimatut DNA: t kiinnittyvät analogisiin kromosomeihin, joista ne on johdettu. (DNA-fragmenteilla, joilla on samat emässekvenssit, on ominaisuus kiinnittyä toisiinsa.)

Tällä tavoin, jos maalatun kromosomin (esimerkiksi keltainen) osa olisi vaihtanut toisen, ei- -maalatut kromosomit (värjätyt punaisina), on mahdollista havaita poikkeama (kutsutaan vastavuoroiseksi translokaatioksi), koska poikkeava kromosomi sisältää sekä keltaisia että punaisia segmenttejä. Yleensä pari kaksivärisiä kromosomeja voidaan havaita yhdessä metafaasissa, koska kaksi kromosomia vaihtaa tyypillisesti osan DNA: sta.

Vastavuoroisia translokaatioita on vaikea havaita värjäämällä yksinkertaisesti koko kromosomiryhmä yhdellä materiaalia, kuten Giemsa. Kuvittele esimerkiksi tapausta, jossa molempien vaihdettujen segmenttien pituus oli samanlainen. Kahden siirretyn kromosomin tulisi näyttää täysin normaaleilta, sekä muodoltaan että pituudeltaan. Jos käytämme FISH: ää, tällainen translokaatio voidaan kuitenkin havaita selvästi.

Kuva. Esimerkki FISH-käsitellyistä metafaasikromosomeista

Tässä kromosomit 1, 2 ja 4 merkittiin keltaisiksi FISH: lla ja muut kromosomit värjättiin punaisiksi. Keltaisen ja punaisen kromosomin väliset translokaatiot havaitaan. Vasen kuva edustaa normaalia solua (kuvan numerot osoittavat kromosomiluvut) ja oikea kuva on esimerkki vastavuoroisesta translokaatiosta, jossa on kaksi kaksiväristä kromosomia (merkitty kahdella nuolella).

Leave a Reply

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista. Pakolliset kentät on merkitty *