4 – ALKUPERÄISET ARTIKKELIMALLIT, BIOLOGISET
Uncaria tomentosa (kissan kynsi) rotilla, joilla on kokeellinen endometrioosi1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometrioosikokeellinen
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow PhD, Sao Paulon liittovaltion yliopisto (UNIFESP) ja endometrioosi- ja kirurgisen laboratorion yksikkö, HU-UFMA, Maranhao, Brasilia. Suunnitteli protokollan, joka liittyi teknisiin menettelyihin, vastasi käsikirjoitusten kirjoittamisesta, vastasi tutkimuksen henkisestä ja tieteellisestä sisällöstä, valvoi tutkimuksen kaikkia vaiheita, toimitti ohjeita kirurgiseen interventioon.
IITutkinto-opiskelija, Maranhaon liittovaltion yliopisto (UFMA) , Brasilia. Mukana teknisissä menettelyissä, vastuussa käsikirjoitusten valmistelusta. IIIMD, Patologian osasto, HU-UFMA, Maranhao, Brasilia. Makroskooppiset ja histopatologiset tutkimukset
IVPhD, apulaisprofessori, UNIFESP, São Paulo ja lantionkivun ja endometrioosin yksikön päällikkö Paulistan lääketieteellisessä koulussa (EPM-UNIFESP), Brasilia. Vastaa tietojen hankkimisesta ja tulkinnasta, auttoi teknisissä toimenpiteissä, antaa ohjeita kirurgisiin toimenpiteisiin.
Kirjeenvaihto
TIIVISTELMÄ
TARKOITUS: Arvioi parenkyymin histologiset muutokset Indusoidun endometrioosin rottien kohdun ja munasarjojen epiteelikerros, hoidettu Uncaria tomentosa -uutteella
MENETELMÄT: 29 rotaa, joilla oli kokeellinen endometrioosi, valittiin ja jaettiin kolmeen ryhmään: Uncaria-ryhmä sai 32 mg / ml Uncaria tomentosa -uutetta, 1 ml annettiin päivittäin ja lumeryhmä sai 1 ml 0,9% suolaliuosta päivässä 14 vuoden ajan. päivää (molemmat ryhmät); leuprolidiryhmä sai leuprolidiasetaattia 1 mg / kg ruumiinpainoa yhtenä ihonalaisena annoksena. Hoidon 15. päivänä kohdun sarvi ja munasarjat poistettiin histopatologista analyysiä varten.
TULOKSET: Unkariaariryhmä esitti yhdeksän näytettä (90%), joissa oli epäkypsiä munasarjarakkuloita, kun taas lumelääkeryhmässä ei ollut tapauksia, ja leuprolidiryhmässä oli kahdeksan rottaa (88%) samalla muutoksella. Lumelääkeryhmässä oli kypsä corpus luteum kaikilla eläimillä, harvemmin uncaria- (10%) ja leuprolidiryhmissä (22%). Kohdun epiteeli osoitti heikkoa lisääntymistä yhdeksässä (90%) uncaria-ryhmän näytteessä, kahdessa (20%) eläimessä lumeryhmässä ja seitsemässä (77,8%) rotassa leuprolidiryhmässä.
PÄÄTELMÄT: Tulokset viittaavat siihen, että Uncaria tomentosalla on ehkäisyvaikutus.
Avainsanat: Endometrioosi. Fytoterapia. Ehkäisy. Rotat.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três groups: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado subcutânea-annoksen única kautta. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
TULOKSET: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no group leuprolida houve oito ratas (88%) comma mesa alteração. O grupo lumelääke edustaja corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no group leuprolida.
PÄÄTELMÄ: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometrioosi. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Johdanto
Endometrioosi on sairaus, jolle on tunnusomaista rakenteellisesti ja toiminnallisesti samanlainen kudos kuin kohdun ontelon ulkopuolella olevalla kohdun limakalvolla, mikä vaikuttaa elämänlaatuun ja lisääntymiskykyyn. potilaiden kapasiteetti. Kehittyy yleensä lantion elimissä, kuten vatsakalvossa, munasarjoissa, munanjohtimissa, kohdussa ja fornixissa Douglas1,2.
Endometrioosin ilmaantuvuus on jopa noin 10% lisääntymisikäisistä naisista. Tämä patologia käyttäytyy kuin estrogeenille reagoiva sairaus, jolla on tulehduksellisia ja immunomoduloivia vaikutuksia sekä solun apoptoosin ja oksidatiivisen stressin epätasapaino2-5.
Endometrioosin hoito voi olla kirurgista tai kliinistä, jonka tavanomainen lääkehoito häiritsee normaalia kuukautiskiertoa aiheuttaen näennäisraskauden, pseudomenopaussin tai kroonisen anovulaation, mikä tarjoaa kliinistä parannusta. Sen vaikutukset eivät kuitenkaan ole parantavia, usein toistuvia, mikä oikeuttaa uusien hoitojen etsimisen6.
Uncaria tomentosa, yleisesti tunnettu kissan kynsi, kuuluu Rubiaceae-perheeseen, jota esiintyy yleisesti trooppisilla alueilla. Etelä- ja Keski-Amerikka. Tätä kasvia käytetään uutteen muodossa laajalti alkuperäiskansojen keskuudessa ja sitä käytetään usein vaihtoehtoisena hoitona erilaisille sairauksille. Tutkimukset ovat osoittaneet, että kissan kynsillä on tulehdusta, immunomoduloivia, apoptoottisia ja antioksidantit sekä ehkäisyvaikutus mahdollisen vaihtoehdon perustelemiseksi endometrioosin hoidossa7,8.
Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida histologisia muutoksia parenkyymin kohdun ja kohdun epiteelikerroksessa. indusoitua endometrioosia sairastavien rottien munasarja, hoidettu Uncaria tomentosa -vesiuutteella (kissan kynsi).
Menetelmät
Tämä kokeellinen tutkimus saatiin päätökseen huhtikuusta toukokuuhun 2011 otokseen 40 aikuista Wistar-rottaa (Rattus norvegicus albinos), naiset, neitsyt, painaa 180–250 grammaa, 60 päivän ikäisenä, tarjoaa Maranhãon liittovaltion yliopiston (UFMA) bioterium.
Tämä tutkimus tehtiin Yhdysvaltain yliopistollisen sairaalan kokeellisen kirurgian laboratoriossa. Maranhãon liittovaltion yliopisto. Se noudatti Brasilian koe-eläinten käyttöä koskevaa lainsäädäntöä (Aroucan laki nro 11 794/2008) ja Kansainvälisen laboratoriot eläintieteiden neuvoston jäseneksi kuuluvan Brasilian eläinkokeiden korkeakoulun (COBEA) asettamia normeja. Eläinkokeiden eettinen komitea (CEEA-UEMA) hyväksyi tutkimuksen protokollanumerolla 011/2011.
Eläimet ryhmiteltiin viisi kohti polypropeenihäkkiä ruostumattomasta teräksestä valmistetulla grillikannella, mitat 46 cm x 31 cm x 16 cm pohja on peitetty lastuilla, vaihdetaan 48 tunnin välein. Eläimiä pidettiin vakio-olosuhteissa, saivat rotanruohoa (Purina®, São Paulo, Brasilia) ja vettä ad libitum seitsemän päivää sopeutumista varten, melun säätelyllä, lämpötila 22 ° C ± 2 ° C, suhteellinen kosteus 40% 60%, 12/12 tuntia valoa / pimeyttä.
Endometrioosin indusointi suoritettiin Nogueira Neton et ai. 9 ehdottaman menetelmän mukaisesti. 21 päivän kuluttua ensimmäisestä leikkauksesta rotille tehtiin jälleen uusi leikkaus, jolloin tehtiin peritoneaalisen ontelon kartoitus identifioimalla ja mittaamalla autotransplantaation fokus digitaalisella pachymetrillä, minkä jälkeen tilavuus laskettiin käyttäen asteen luokitusjärjestelmää Kasvuimplantit Queredan et ai. 10 mukaisesti. Ainoastaan ne, joiden kasvutaso oli kehittynyt kaksi ja kolme, pysyivät tutkimuksessa.
Rotat jaettiin satunnaisesti kolmeen ryhmään. Jokainen eläin merkittiin hännään neljän millimetrin kestoharjalla (Pilot®, São Paulo, Brasilia) ja häkit tunnistettiin. Rehun aloitus oli 22 endometrioosin induktion leikkauksen jälkeisestä päivästä.
Ryhmät jaettiin seuraavasti: Uncaria-ryhmä sai suolet 32 mg / ml Uncaria tomentosa -uutetta (Kissan kynsi 100 mg, Herbarium of Brasilia), annettiin 1 ml päivässä, ja lumelääkeryhmä sai päivittäin rehua 1 ml: lla suolaliuosta 0,9%, molemmat 14 päivän ajan Nogueira Neto et ai. 9 mukaan. Ryhmän leuprolidi sai leuprolidiasetaattia 1 mg / kg ruumiinpainoa (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT Brasiliasta) kerta-annos ihon alle 11.
Kokeellinen lääke koostuu 16 g kissan kynsiuutetta (Uncaria tomentosa) ja 500 ml 0,9% suolaliuosta. Käsittely tehtiin jauhamalla 160 tablettia 100 mg kissan kynsiuutetta (Cat’s s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) posliinilaastissa survimella ja sitten liuottamalla se 500 ml: aan 0,9% NaCl: a. dekantterilasissa sekoittamiseksi tasaiseksi. Seos valmistettiin keskimäärin 15 minuutissa, ja kokonaistilavuus oli 500 ml suspensiota pitoisuudella 32 mg / ml9.
Hoidon päättymisen jälkeen tehtiin uusi leikkaus ja tällä hetkellä , peritoneaalisen ontelon luettelo tehtiin uudelleen. Jäljellä oleva oikea kohdun sarvi ja molemmat munasarjat poistettiin histologista arviointia varten. Poistetut osat puhdistettiin 0,9% suolaliuoksella ja varastoitiin astiaan, jossa oli 10% puskuroitua formaliinia, tunnistetiedot ja lähetettiin edelleen Maranhãon liittovaltion yliopiston yliopistollisen sairaalan patologiaosastolle. Kudosleikkeet tehtiin ja värjättiin hematoksyliini-eosiinilla (HE).
Kunkin ryhmän eläimet tapettiin 15. päivänä hoidon aloittamisen jälkeen. Painon jälkeen heille on annettu 150 mg / kg natriumtiopentaalia (Thiopental®, Crystal, St.Paul) vatsakalvonsisäisen antamisen kautta.Lääke laimennettiin yhtä suureen määrään suolaliuosta päätöslauselman numero 714, 20. kesäkuuta 2002, liittovaltion eläinlääketieteellisen neuvoston (CFMV) mukaan. Kuolemalle oli tunnusomaista sydän-hengityspysähdys ja refleksien täydellinen puuttuminen.
Tietojen analyysi oli kuvaileva Mukherjin ja Bhowmikin12 histologisten löydösten perusteella.
Tulokset
Alkuperäisestä 40 rotan näytteestä kymmenen suljettiin pois, koska he eivät kehittäneet endometrioosiluokkia kaksi ja kolme, ja yksi johtui aspiraatiosta rehun kautta. Lopullinen näyte koottiin 29 rotalle, jaettuna kolmeen ryhmään: uncaria ja lumelääke, molemmissa kymmenen eläintä; ja leuprolidiryhmä yhdeksän rotan kanssa.
Uncaria tomentosa -hoitoa saavalla ryhmällä (Uncaria-ryhmä) paljastui yhdeksässä tapauksessa (90%) kypsymättömiä munarakkuloita (taulukko 1 ja kuva 1), ja follikkelit olivat täysin kypsyneitä ja kypsiä keltakehän (taulukko 2) esiintyminen yhdessä tapauksessa (10%).
Kohdun histologia (taulukko 3) osoitti heikosti lisääntyvää endometriumia (kuva 2) yhdeksässä näytteessä (90) %).
Lumelääke ryhmässä oli follikkelia täydellä kypsymisellä ja kypsä corpus luteum kaikissa tapauksissa (100%). Kohdun limakalvoon nähden se oli proliferatiivinen kahdeksassa tapauksessa (80%).
Leuprolidiryhmässä oli kypsymättömiä munarakkuloita kaikissa näytteissä ja atrofoitunutta keltarauhasia kahdeksassa näytteessä (88%). Kohdun limakalvo oli atrofioitu (kuva 3) kahdessa tapauksessa (22,2%) ja heikosti proliferatiivinen seitsemässä tapauksessa (77,8%).
Keskustelu
Kliinisistä ja kokeellisista tiedoista lääkekasvien käytöstä endometrioosin hoidossa kerrottiin, että monet lääkkeet, joilla on tulehdusta, kipua lievittäviä, immunomoduloivia ja antioksidantteja, ovat tehokkaita tämän taudin torjunnassa. Uudet kliiniset tutkimukset yrttien tehokkuudesta ovat välttämättömiä endometrioosin hoidossa naisilla13. Tässä mielessä Euroopan ihmisen lisääntymis- ja embryologiayhdistyksen suorittamassa endometrioosin diagnoosin ja hoidon näyttöoppaassa harkitaan D-luokan suositustasoa lääkekasvien käytöstä endometrioosin hoidossa, toisin sanoen ei ole näyttöä tukemaan näitä hoitoja, mutta tämä yhteiskunta suosittelee, että kasviperäisiä lääkkeitä ei tule hävittää, koska joillakin tätä yrttiä käyttäneillä naisilla on havaittu kivun heikkenemistä ja parantunutta elämänlaatua. Lisäksi meillä on tosiasia, että kissan kynsi on jo antanut luvan käyttää sitä laitoksissa, kuten FDA: ssa (Food and Drug Administration), ravintolisänä.
Endometrioositieto fysiopatologiasta, johon liittyy tulehduksellisia muutoksia, apoptoottinen , immunomoduloivat ja antioksidantit, antoivat perustan kokeellisesti käyttää lääkkeitä, joilla on toimintamekanismeja, joilla on edellä mainittujen muutosten haitallisia vaikutuksia. Kokeellinen tutkimus, jossa käytettiin tätä uutetta, osoitti endometriumin kohdennuksen vähenevän merkittävästi9.
Kun on todettu, että kissan kynsi vähentää endometrioosia kokeellisesti, on tarpeen arvioida Uncaria tomentosan toimintamekanismi tämän patologian hoidossa. Lääkkeistä, joita yleisesti käytetään endometrioosin hoitoon, ovat ehkäisyvalmisteet, joiden vaikutus tunnetaan endometrioosia vastaan. Maitorauhaskasvainkudoksen in vitro -viljelyssä (tunkeutuva ductal-karsinooma, vaihe II ja huonosti erilaistunut) käytettiin Uncaria tomentosa -laitetta ja verrattiin metotreksaattiin, jossa havaittiin tämän kasviperäisen lääkkeen aiheuttaman estrogeenireseptorien tietyn alueen vähenemistä ehkäisyteho Uncaria tomentosa -bakteerille 15. Tämän lähtökohdan perusteella on tullut tarpeelliseksi arvioida kissan kynsien ehkäisyvaikutus.
Ehkäisyvaikutusten arvioimiseksi valittu histologinen parametri tehtiin tutkimuksen perusteella, jossa tutkittiin lihaksensisäisen medroksi-progesteronin käyttö rotilla, joilla oli erilaiset annokset, mitä seurasi näytteen munasarjojen ja kohdun epiteelikerroksen histologinen analyysi12. Ne järjestettiin kolmeen ryhmään, kokeellisiin, positiivisiin ja negatiivisiin kontrolleihin. Kokeellinen ryhmä (Uncaria-ryhmä) käytti 32 mg / päivä Uncaria tomentosa -uutetta ja negatiivisessa kontrolliryhmässä (lumelääkeryhmä) käytettiin päivittäin 1 ml suolaliuosta 0,9% Neto e: n perusteella t al.9, joka osoitti endometrioosin merkittävää vähenemistä ilman kliinisiä komplikaatioita. Positiivinen kontrolliryhmä (leuprolidiryhmä) sai leuprolidiasetaattia 1 mg / kg ruumiinpainoa yhtenä ihonalaisena annoksena Oktem et ai. 11: n perusteella, jossa arvioitiin korkean atorvastatiiniannoksen käyttöä kokeellisessa endometrioosissa tyydyttävillä tuloksilla11. Leuprolidiasetaatti on GnRH-analogi, jolla on erinomaiset tulokset naisilla, joilla on endometrioosi, mutta sen käyttö on vähäistä sivuvaikutusten takia, jolle on tyypillistä luun häviäminen ja ilmastovaikutukset14.
Munasarjojen histologinen analyysi osoitti samanlaisia muutoksia uncaria- ja leuprolidiryhmissä, mikä osoittaa, että useimmissa näytteissä ei ole corpus luteumin ja primaaristen munasarjatuppien atrofiaa, mikä viittaa munasarjojen toiminnan puuttumiseen. Kohtuepiteelikerroksen histologisessa arvioinnissa Uncaria- ja leuprolidiryhmät tekivät jälleen samanlaisen, näytteillään näytti heikosti proliferatiivisia epiteelikerroksia, toisin kuin lumelääkeryhmässä havaittiin kaikkien näytteiden kanssa proliferatiivisessa vaiheessa. Nämä Mukherjin ja Bhowmik12: n tiedot ovat yhteensopivia ehkäisyn kanssa.
Päätelmä
Ottaen huomioon histopatologiset löydökset rotilla, joilla on kokeellinen endometrioosi, altistettuna Uncaria tomentosa -uutteelle, ja verrattu positiiviseen ja negatiiviseen kontrolliin ryhmien suosittelemme, että löydetyt muutokset ovat yhteensopivia ehkäisyn kanssa.
1. Sampson J.Peritoneaalinen endometrioosi johtuu kohdun limakalvon kudoksen kuukautiskierteestä peritoneaaliseen onteloon. Olen J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Peritoneaalisen endometrioosin indusointi alastomissa hiirissä käyttämällä ihmisen kuolemattomia endometrioosiepiteelisoluja ja stromasoluja: potentiaalinen kokeellinen työkalu endometrioosin molekyylipatogeneesin tutkimiseen ihmisillä. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Apoptoosin ja eutooppisen kohdun limakalvon makrofagien lukumäärän suhde naisilta, joilla on tai ei ole endometrioosia. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Oliivi DL, Pritts AE. Endometrioosin hoito. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K.Muutokset kromosomirakenteessa, mitoottisessa aktiivisuudessa ja Allium Test -solujen ydin-DNA-sisällössä aiheuttamat Uncaria tomentosa (Wild ) DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E.Kokeellinen endometrioosin vähentäminen rotilla, jotka on hoidettu Uncaria tomentosa (kissan kynsi) -uutteella. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P.Triptoreliinin ja gestrinonin yksittäiset ja yhdistetyt vaikutukset kokeelliseen rotan endometrioosiin. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologiset muutokset rotan munasarjassa ja kohdussa injektoitavan ehkäisyhoidon jälkeen. Ehkäisy. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Uncaria tomentosan estrogeenireseptorin erityisten sitoutumiskohtien ehtyminen. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Eturistiriita: ei ole
Taloudellinen lähde: ei ole