4 – ORIGINAL ARTICLE MODELS, BIOLOGICAL
Prevensjonseffekt av Uncaria tomentosa (kattens klo) hos rotter med eksperimentell endometriose1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow PhD-grad, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP) og Unit of Endometriosis and Surgical Laboratory, HU-UFMA, Maranhao, Brasil. Designet protokollen, involvert med tekniske prosedyrer, ansvarlig for manuskriptskriving, ansvarlig for intellektuelt og vitenskapelig innhold i studien, overvåket alle faser av studien, ga retningslinjer for kirurgisk inngrep
IIGraduate student, Federal University of Maranhao (UFMA) , Brasil. Involvert med tekniske prosedyrer, ansvarlig for utarbeidelse av manuskript
IIIMD, Pathology Department, HU-UFMA, Maranhao, Brazil. Makroskopiske og histopatologiske undersøkelser
IVPhD, tilknyttet professor, UNIFESP, Sao Paulo og enhetsleder for bekkenpain og endometriose ved Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brasil. Ansvarlig for tilegnelse og tolkning av data, hjulpet med tekniske prosedyrer, gi retningslinjer for kirurgiske inngrep
Korrespondanse
ABSTRAKT
FORMÅL: Evaluere de histologiske endringene i parenkym Epitelag i livmoren og eggstokkene hos rotter med indusert endometriose, behandlet med Uncaria tomentosa ekstrakt.
METODER: 29 rotter med eksperimentell endometriose ble valgt og delt inn i tre grupper: uncaria-gruppen mottok 32 mg / ml Uncaria tomentosa-ekstrakt, 1 ml administrert daglig og placebogruppen fikk 1 ml saltvann 0,9% per dag, i løpet av 14 dager (begge gruppene); leuprolidgruppen fikk leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvekt påført enkelt subkutan dose. På den 15. behandlingsdagen ble livmorhornet og eggstokkene fjernet for histopatologisk analyse.
RESULTATER: Uncaria-gruppen presenterte ni prøver (90%) med umodne eggstokkfollikler, mens placebogruppen ikke ga noen tilfeller, og i leuprolidgruppen var det åtte rotter (88%) med samme endring. Placebogruppen viste moden corpus luteum hos alle dyr, og forekommer sjeldnere i uncaria (10%) og leuprolid (22%) grupper. Livmorepitelet viste svak proliferasjon i ni (90%) prøver av uncaria-gruppen, hos to (20%) dyr i placebogruppen og syv (77,8%) rotter i leuprolidgruppen.
KONKLUSJONER: Funnene antyder at Uncaria tomentosa har prevensjonseffekt.
Stikkord: Endometriose. Fytoterapi. Prevensjon. Rotter.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo gro po placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado via subcutânea dose única. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RESULTADOS: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Introduksjon
Endometriose er en sykdom som er preget av tilstedeværelsen av vev som er strukturelt og funksjonelt lik endometriumvevet utenfor livmorhulen, noe som påvirker livskvaliteten og reproduktive pasientens kapasitet. Utvikler seg vanligvis i bekkenorganene som peritoneum, eggstokkene, egglederne, livmoren og fornix Douglas1,2.
Forekomsten av endometriose er så høy som rundt 10% av kvinnene i reproduktiv alder. Denne patologien oppfører seg som en østrogenresponsiv sykdom med inflammatoriske og immunmodulerende aktiviteter, samt ubalanse mellom cellulær apoptose og oksidativt stress2-5.
Behandlingen av endometriose kan være kirurgisk eller klinisk, hvis vanlige medisineringsterapi er en som forstyrrer den normale menstruasjonssyklusen som induserer pseudograviditet, pseudomenopause eller kronisk anovulering, og gir klinisk forbedring. Effektene er imidlertid ikke helbredende, med hyppige gjentakelser, som rettferdiggjør søket etter nye behandlinger6.
Uncaria tomentosa, populært kjent som kattens klo, tilhører familien Rubiaceae, som ofte finnes i tropiske områder av Sør- og Mellom-Amerika. Denne planten, i form av ekstrakt, brukes mye av urfolk og brukes ofte som en alternativ behandling for ulike sykdommer. Studier har vist at kattens klo har antiinflammatorisk, immunmodulerende, pro-apoptotisk og antioksidant, samt prevensjonseffekt, for å rettferdiggjøre et mulig alternativ for behandling av endometriose7,8.
Målet med denne studien var å evaluere de histologiske endringene i parenkymets epitellag i livmoren og eggstokk fra rotter med indusert endometriose, behandlet med Uncaria tomentosa vandig ekstrakt (kattens klo).
Metoder
Denne eksperimentelle studien ble avsluttet mellom april og mai 2011, med et utvalg av 40 Wistar-rotter (Rattus norvegicus albinos) voksne, hunner, jomfru, som veier mellom 180 og 250 gram, med 60 dagers alder, levert av Bioterium ved Federal University of Maranhão (UFMA).
Denne undersøkelsen ble utført ved Experimental Surgery Laboratory ved University Hospital of the Federal University of Maranhão. Den fulgte den brasilianske lovgivningen for bruk av forsøksdyr (Arouca Law No. 11,794 / 2008) og standardene satt av Brazilian College of Animal Experimentation (COBEA), en institusjon tilknyttet International Council for Laboratory Animal Science. Studien ble godkjent av Animal Experimentation Ethics Committee (CEEA-UEMA) under protokoll nummer 011/2011.
Dyrene ble gruppert fem per polypropylenbur med grilldeksel i rustfritt stål, som måler 46 cm x 31 cm x 16 cm med bunnen dekket med spon, skiftes hver 48. time. Dyrene ble holdt under konstante miljøforhold, mottok rotte chow (Purina®, São Paulo, Brasil) og vann ad libitum i syv dager for tilpasning, med støykontroll, temperatur 22 ° C ± 2 ° C, relativ fuktighet 40% 60%, 12/12 timer lys / mørk syklus.
Induksjon av endometriose ble utført i henhold til metoden foreslått av Nogueira Neto et al.9. Etter 21 dager siden den første operasjonen, gjennomgikk rottene ytterligere kirurgi igjen, på hvilket tidspunkt det ble gjort en oversikt over peritoneal hulrom med identifikasjon og måling av autotransplantasjonsfokus med et digitalt pachymeter, etterfulgt av å beregne volumet ved hjelp av gradsklassifiseringssystemet for Vekstimplantater i samsvar med Quereda et al.10. Bare de som har utviklet vekstnivå to og tre forble i studien.
Rotter ble tilfeldig delt inn i tre grupper. Hvert dyr ble merket på halen med fire mm permanent børste (Pilot®, São Paulo, Brasil) og burene ble identifisert. Begynnelsen av sonde var fra 22 postkirurgisk dag med endometrioseinduksjon.
Gruppene ble delt inn som følger: gruppe Uncaria mottok sonde med 32 mg / ml Uncaria tomentosa ekstrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brasil), administrert 1 ml per dag, og placebogruppen mottok daglig sonde med 1 ml saltvann 0,9%, begge i 14 dager ifølge Nogueira Neto et al.9. Gruppen leuprolid fikk leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvekt (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT of Brazil) enkelt subkutan dose11.
Det eksperimentelle medikamentet består av 16 g kattekloekstrakt (Uncaria tomentosa) og 500 ml 0,9% saltoppløsning. Behandlingen ble utført ved å male 160 tabletter med 100 mg kattekloekstrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) i en porselensmørtel med en pistol, og deretter fortsette med oppløsningen av den i 500 ml 0,9% NaCl i et beger for å blande til det er glatt. Blandingen ble laget i en gjennomsnittlig tid på 15 minutter, og det totale volumet var 500 ml i suspensjon med en konsentrasjon på 32 mg / ml 9.
Etter avsluttet behandling ble en ny operasjon utført, og på dette tidspunktet , ble lageret av bukhulen gjort igjen. Det gjenværende høyre livmorhornet og begge eggstokkene ble fjernet for histologisk evaluering. Delene som ble fjernet ble renset med 0,9% saltløsning og lagret i beholder med 10% bufret formalin, mottatt identifikasjon og sendt videre til patologiavdelingen ved universitetssykehuset ved Federal University of Maranhão. Vevssnitt ble laget og farget med hematoksylin-eosin (HE).
Dyrene i hver gruppe ble drept den 15. dagen etter behandlingens begynnelse. Etter vekt har de fått 150 mg / kg natriumtiopental (Thiopental®, Crystal, St. Paul) gjennom intraperitoneal administrering.Legemidlet ble fortynnet i like stort saltvann, i henhold til resolusjon nummer 714, 20. juni 2002, Federal Council of Veterinary Medicine (CFMV). Døden var preget av kardio-respirasjonsstans og fullstendig fravær av reflekser.
Dataanalyse var beskrivende, basert på de histologiske funnene ifølge Mukherji og Bhowmik12.
Resultater
Fra den første prøven på 40 rotter ble ti ekskludert for ikke å utvikle endometriose grad to og tre, og en på grunn av aspirasjon under sonde. Den endelige prøven ble sammensatt for 29 rotter, fordelt i tre grupper: uncaria og placebo, begge med ti dyr; og leuprolidgruppe med ni rotter.
Gruppen som ble behandlet med Uncaria tomentosa (Uncaria-gruppe) avslørte umodne follikler (Tabell 1 og Figur 1) i ni tilfeller (90%), og folliklene med full modning og moden corpus luteum (tabell 2) er tilstede i ett tilfelle (10%).
Livmorhistologien (tabell 3) viste svakt proliferativ endometrium (figur 2) i ni prøver (90 %).
Placebo gruppen hadde follikler med full modning og moden corpus luteum i alle tilfeller (100%). I forhold til endometrium var den proliferativ i åtte tilfeller (80%).
Leuprolidgruppen hadde umodne follikler i alle prøvene og atrofert corpus luteum i åtte prøver (88%). Endometrium ble atrofiert (figur 3) i to tilfeller (22,2%), og svakt proliferativ i sju tilfeller (77,8%).
Diskusjon
Studier med kliniske og eksperimentelle data om bruk av medisinske urter for å behandle endometriose, rapporterte at flere legemidler med antiinflammatoriske, smertestillende, immunmodulerende og antioksidantegenskaper er effektive for å bekjempe denne sykdommen. Nye kliniske studier om effektiviteten av urter er nødvendige for behandling av endometriose hos kvinner13. I denne forstand vurderer evidensguiden for endometriose-diagnosen og behandlingen utført av European Society of Human Reproduction and Embryology, en anbefaling av grad D for bruk av medisinske urter i behandlingen av endometriose, det vil si at det ikke er bevis for å støtte disse behandlingene, men dette samfunnet anbefaler at urtemedisiner ikke skal kastes fordi det hos noen kvinner som brukte disse urtene har blitt lagt merke til redusert smerte og forbedret livskvalitet. I tillegg har vi det faktum at kattens klo allerede har godkjent bruken av institusjoner som FDA (Food and Drug Administration) som et kosttilskudd.
Endometriose kunnskap om fysiopatologi med betennelsesendringer, apoptotisk , immunmodulerende og antioksidant, ga grunnlag for å bruke legemidler, eksperimentelt, som har virkningsmekanismer med uønskede effekter av disse endringene nevnt ovenfor. En eksperimentell studie med dette ekstraktet viste signifikant reduksjon av endometriefokus9.
En gang fastslått at kattens klo reduserer endometriose eksperimentelt, er det nødvendig å evaluere Uncaria tomentosa-handlingsmekanismen for behandling av denne patologien. Blant medikamentene som ofte brukes til å behandle endometriose er prevensjonsmidler, med kjent virkning mot endometriose. I evalueringen av in vitro-kultur av brystsvulstvevet (infiltrerende duktalt karsinom, trinn II og dårlig differensiert) ble Uncaria tomentosa brukt og sammenlignet med metotreksat, hvor det ble observert reduksjon i spesifikt område av østrogenreseptorer forårsaket av denne urtemedisinen, som en prevensjonshandling mot Uncaria tomentosa 15. Basert på denne forutsetningen har det blitt nødvendig å evaluere prevensjonseffekten av kattens klo.
Den histologiske parameteren som ble valgt for å evaluere prevensjonseffektene ble laget basert på en studie som undersøkte bruk av intramuskulært medroksy-progesteron hos rotter med forskjellige doser, etterfulgt av histologisk analyse av eggstokkene og livmorepitellaget i prøven 12. De ble organisert i tre grupper, eksperimentelle, positive og negative kontroller. Eksperimentell gruppe (Uncaria-gruppe) brukte 32 mg / dag Uncaria tomentosa ekstrakt og den negative kontrollgruppen (Placebo-gruppen) brukt daglig 1 ml saltvann 0,9% basert på Neto e t al.9, som viste signifikant reduksjon av endometriose uten kliniske komplikasjoner. Den positive kontrollgruppen (leuprolidgruppe) mottok leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvekt påført enkelt subkutan dose, basert på Oktem et al.11, som evaluerte bruken av høy dose atorvastatin på eksperimentell endometriose med tilfredsstillende resultater11. Leuprolidacetatet er en GnRH-analog, som har utmerkede resultater hos kvinner med endometriose, men har begrenset bruk på grunn av bivirkninger, hovedsakelig preget av bentap og klimatiske klager14.
Histologisk analyse av eggstokkene viste lignende endringer i uncaria- og leuprolidgrupper, som viste fravær av atrofi av corpus luteum og primære eggstokkfollikler, i de fleste prøver, noe som antyder fravær av ovarial aktivitet. I histologisk evaluering av livmorepitellaget, utførte Uncaria- og leuprolidgrupper igjen tilsvarende, med prøvene deres viste svakt proliferative epitellag, i motsetning til det som ble observert i placebogruppen med alle prøvene i den proliferative fasen. Disse dataene ifølge Mukherji og Bhowmik12 er kompatible med prevensjon.
Konklusjon
Tatt i betraktning de histopatologiske funnene hos rotter med eksperimentell endometriose eksponert for ekstraktet av Uncaria tomentosa og sammenlignet med positiv og negativ kontroll grupper, foreslår vi at endringene som er funnet er kompatible med prevensjon.
1. Sampson J. Peritoneal endometriose på grunn av menstruasjonsspredning av endometrievev i bukhulen. Am J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Induksjon av peritoneal endometriose i nakenmus ved bruk av humane udødeliggjorte endometrioseepitel- og stromaceller: et potensielt eksperimentelt verktøy for å studere molekylær patogenese av endometriose hos mennesker. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Forholdet mellom apoptose og antall makrofager i eutopisk endometrium fra kvinner med og uten endometriose. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Behandling av endometriose. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K. Endringer i kromosomstruktur, mitotisk aktivitet og nukleært DNA-innhold fra celler i Allium Test indusert av barkvannekstrakt av Uncaria tomentosa (Wild DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Eksperimentell endometriose reduksjon hos rotter behandlet med Uncaria tomentosa (kattens klo) Ekstrakt. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Individuelle og kombinerte effekter av triptoreline og gestrinon på eksperimentell endometriose i rotte. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologiske endringer i eggstokken og livmoren til rotte etter injiserbar prevensjonsbehandling. Prevensjon. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Utmattelse av spesifikke bindingssteder for østrogenreseptor av Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Interessekonflikt: ingen
Finansiell kilde: ingen