4 – ORYGINALNE MODELE ARTYKUŁÓW, BIOLOGICZNE
Antykoncepcyjny efekt Uncaria tomentosa (pazur kota) u szczurów z eksperymentalną endometriozą1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura Rodrigues II; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
I Doktorat, Uniwersytet Federalny w Sao Paulo (UNIFESP) i Zakład Endometriozy i Laboratorium Chirurgiczne, HU-UFMA, Maranhao, Brazylia. Zaprojektował protokół, zaangażowany w procedury techniczne, odpowiedzialny za napisanie manuskryptu, odpowiedzialny za zawartość intelektualną i naukową badania, nadzorował wszystkie fazy badania, przedstawił wytyczne dotyczące interwencji chirurgicznej
II Graduation student, Federal University of Maranhao (UFMA) , Brazylia. Zaangażowany w procedury techniczne, odpowiedzialny za przygotowanie manuskryptu
IIIMD, Oddział Patologii, HU-UFMA, Maranhao, Brazylia. Badania makroskopowe i histopatologiczne
IVPhD, profesor stowarzyszony, UNIFESP, Sao Paulo i kierownik oddziału bólu miednicy i endometriozy Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brazylia. Odpowiedzialny za pozyskiwanie i interpretację danych, pomoc w procedurach technicznych, dostarczanie wytycznych dotyczących interwencji chirurgicznych
Korespondencja
STRESZCZENIE
CEL: Ocena zmian histologicznych w miąższu „Warstwa nabłonka macicy i jajnika u szczurów z endometriozą indukowaną, leczonych ekstraktem z Uncaria tomentosa.
METODY: 29 szczurów z eksperymentalną endometriozą zostało wyselekcjonowanych i podzielonych na trzy grupy: Grupa uncaria otrzymywała 32 mg / ml ekstraktu Uncaria tomentosa, 1 ml podawana dziennie, a grupa placebo otrzymywała 1 ml soli fizjologicznej 0,9% dziennie, przez 14 dni (obie grupy); grupa otrzymująca leuprolid otrzymywała octan leuprolidu w dawce 1 mg / kg masy ciała w pojedynczej dawce podskórnej. W 15. dobie leczenia usunięto róg macicy i jajniki do analizy histopatologicznej.
WYNIKI: Grupa uncaria przedstawiła dziewięć próbek (90%) z niedojrzałymi pęcherzykami jajnikowymi, podczas gdy grupa placebo nie wykazała żadnego przypadku, aw grupie leuprolidu było osiem szczurów (88%) z taką samą zmianą. Grupa placebo wykazywała dojrzałe ciałko żółte u wszystkich zwierząt, rzadziej występujące w grupach uncaria (10%) i leuprolid (22%). Nabłonek macicy wykazywał słabą proliferację w dziewięciu (90%) próbkach z grupy uncaria, u dwóch (20%) zwierząt w grupie placebo i siedmiu (77,8%) szczurów w grupie leuprolidu.
WNIOSKI: Wyniki sugerują, że Uncaria tomentosa ma działanie antykoncepcyjne.
Słowa kluczowe: endometrioza. Fitoterapia. Zapobieganie ciąży. Szczury.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado via subcutânea dawki única. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
WYNIKI: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
WNIOSEK: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Wprowadzenie
Endometrioza to choroba charakteryzująca się obecnością tkanki podobnej strukturalnie i funkcjonalnie do tkanki endometrium poza jamą macicy, co wpływa na jakość życia i reprodukcję pojemność pacjentów. Zwykle rozwija się w narządach miednicy, takich jak otrzewna, jajniki, jajowody, macica i sklepienie Douglas1,2.
Zapadalność na endometriozę sięga około 10% kobiet w wieku rozrodczym. Ta patologia zachowuje się jak choroba reagująca na estrogeny z działaniem zapalnym i immunomodulującym, a także z zaburzeniem równowagi apoptozy komórkowej i stresem oksydacyjnym2-5.
Endometrioza może być leczona chirurgicznie lub klinicznie, przy czym zwykle stosowana terapia to taka, która zakłóca normalny cykl miesiączkowy, wywołując ciążę rzekomą, pseudomenopauzę lub przewlekły brak owulacji, zapewniając kliniczną poprawę. Jednak jej efekty nie są lecznicze, z częstymi nawrotami, co uzasadnia poszukiwanie nowych metod leczenia6.
Uncaria tomentosa, popularnie znana jako pazur kota, należy do rodziny Rubiaceae, powszechnie występującej w tropikalnych obszarach Ameryka Południowa i Środkowa. Roślina ta, w postaci ekstraktu, jest szeroko stosowana przez rdzennych mieszkańców i często jest stosowana jako alternatywne leczenie różnych chorób. Badania wykazały, że koci pazur ma działanie przeciwzapalne, immunomodulujące, proapoptotyczne i działanie przeciwutleniające, a także antykoncepcyjne, uzasadniające możliwą alternatywę leczenia endometriozy7,8.
Celem tego badania była ocena zmian histologicznych w warstwie nabłonkowej macicy i jajnika szczurów z endometriozą indukowaną, leczonych wodnym ekstraktem z Uncaria tomentosa (pazur kota).
Metody
To badanie eksperymentalne zostało zakończone między kwietniem a majem 2011, z próbką 40 dorosłych szczurów rasy Wistar (Rattus norvegicus albinos), samice, dziewica, ważąca od 180 do 250 gramów, mająca 60 dni, dostarczona przez Bioterium Uniwersytetu Federalnego w Maranhão (UFMA).
Badania te zostały przeprowadzone w Laboratorium Chirurgii Eksperymentalnej Szpitala Uniwersyteckiego w Uniwersytet Federalny w Maranhão. Postępowano zgodnie z brazylijskim ustawodawstwem dotyczącym wykorzystywania zwierząt doświadczalnych (ustawa Arouca nr 11 794/2008) oraz standardami ustanowionymi przez Brazylijskie Kolegium Doświadczeń na Zwierzętach (COBEA), instytucję stowarzyszoną z Międzynarodową Radą ds. Nauk o Zwierzętach Laboratoryjnych. Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję ds. Etyki Eksperymentów na Zwierzętach (CEEA-UEMA) zgodnie z protokołem nr 011/2011.
Zwierzęta pogrupowano po pięć w klatce polipropylenowej z osłoną ze stali nierdzewnej o wymiarach 46 cm x 31 cm x 16 cm z dnem pokrytym wiórami, wymieniane co 48 godzin. Zwierzęta trzymano w stałych warunkach środowiskowych, otrzymując karmę dla szczurów (Purina®, São Paulo, Brazylia) i wodę ad libitum przez siedem dni na adaptację, z kontrolą hałasu, temperatura 22 ° C ± 2 ° C, wilgotność względna 40% 60%, Cykl światło / ciemność 12/12 godzin.
Indukcję endometriozy przeprowadzono zgodnie z metodologią zaproponowaną przez Nogueira Neto i wsp.9. Po 21 dniach od pierwszej operacji szczury ponownie przeszły kolejną operację, w czasie której dokonano inwentaryzacji jamy otrzewnej z identyfikacją i pomiarem ogniska autotransplantacji za pomocą pachymetru cyfrowego, a następnie wyliczono objętość za pomocą systemu klasyfikacji stopni Growth Implants według Quereda i wsp. 10. W badaniu pozostały tylko te, które rozwinęły dwa i trzy poziomy wzrostu.
Szczury podzielono losowo na trzy grupy. Każde zwierzę zaznaczono na ogonie za pomocą trwałej szczoteczki o średnicy 4 mm (Pilot®, São Paulo, Brazylia) i zidentyfikowano klatki. Sondowanie rozpoczęto od 22 dnia po zabiegu indukcji endometriozy.
Grupy podzielono w następujący sposób: grupa Uncaria otrzymała zgłębnik z 32 mg / ml ekstraktu Uncaria tomentosa (Cat „s Claw 100mg, Herbarium of Brazylia), podawano 1 ml dziennie, a grupa placebo otrzymywała codziennie przez zgłębnik 1 ml soli fizjologicznej 0,9%, oba przez 14 dni według Nogueira Neto i wsp.9. 75 mg, ABBOTT z Brazylii) pojedyncza dawka podskórna11.
Eksperymentalny lek składa się z 16 g ekstraktu z kocich pazurów (Uncaria tomentosa) i 500 ml 0,9% roztworu soli. Przetwarzanie przeprowadzono poprzez zmielenie 160 tabletek po 100 mg wyciągu z kocich pazurów (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) w porcelanowym moździerzu z tłuczkiem, a następnie rozpuszczenie go w 500 ml 0,9% NaCl w zlewce, aby wymieszać do uzyskania gładkości. Miksturę wykonano średnio w czasie 15 minut, a całkowita objętość wynosiła 500 ml zawiesiny o stężeniu 32 mg / ml9.
Po zakończeniu leczenia wykonano nową operację iw tym czasie ponownie wykonano inwentaryzację jamy otrzewnowej. Pozostały prawy róg macicy i oba jajniki usunięto do oceny histologicznej. Usunięte części oczyszczono 0,9% roztworem soli i przechowywano w pojemniku z 10% buforowaną formaliną, otrzymano identyfikację i przekazano do Oddziału Patologii Szpitala Uniwersyteckiego Federalnego Uniwersytetu w Maranhão. Skrawki tkanek wykonano i barwiono hematoksyliną-eozyną (HE).
Zwierzęta w każdej grupie zabijano 15 dnia po rozpoczęciu leczenia. Po zważeniu podano im 150 mg / kg tiopentalu sodu (Thiopental®, Crystal, St. Paul) przez podanie dootrzewnowe.Lek rozcieńczono w równej objętości soli fizjologicznej, zgodnie z rezolucją nr 714 z 20 czerwca 2002 r. Federalnej Rady Medycyny Weterynaryjnej (CFMV). Śmierć charakteryzowała zatrzymanie krążenia i oddechu oraz całkowity brak odruchów.
Analiza danych była opisowa, oparta na wynikach histologicznych według Mukherjiego i Bhowmika12.
Wyniki
Z początkowej próbki 40 szczurów wykluczono dziesięć z powodu braku endometriozy w stopniu drugim i trzecim, a jeden z powodu aspiracji podczas zgłębnika. Ostateczna próbka składała się z 29 szczurów, podzielonych na trzy grupy: uncaria i placebo, obie z dziesięcioma zwierzętami; i grupa leuprolidowa z dziewięcioma szczurami.
Grupa leczona Uncaria tomentosa (grupa Uncaria) ujawniła niedojrzałe pęcherzyki (Tabela 1 i Rycina 1) w dziewięciu przypadkach (90%), a pęcherzyki z pełnym dojrzewaniem i dojrzałością ciałko żółte (Tabela 2) występuje w jednym przypadku (10%).
Histologia macicy (Tabela 3) wykazała słabo proliferujące endometrium (Ryc. 2) w dziewięciu próbkach (90 %).
Placebo grupa miała pęcherzyki w pełni dojrzałe i dojrzałe ciałko żółte we wszystkich przypadkach (100%). W odniesieniu do endometrium wykazał proliferację w ośmiu przypadkach (80%).
Grupa leuprolidów miała niedojrzałe pęcherzyki we wszystkich próbkach i zanik ciałka żółtego w ośmiu próbkach (88%). Endometrium uległo atrofii (ryc. 3) w dwóch przypadkach (22,2%) i słabo proliferacyjnym w siedmiu przypadkach (77,8%).
Dyskusja
Badania obejmujące dane kliniczne i eksperymentalne dotyczące stosowania ziół leczniczych w leczeniu endometriozy wykazały, że kilka leków o właściwościach przeciwzapalnych, przeciwbólowych, immunomodulujących i przeciwutleniających jest skutecznych w zwalczaniu tej choroby. Konieczne są nowe badania kliniczne dotyczące skuteczności ziół w leczeniu endometriozy u kobiet13. W tym sensie w przewodniku dowodowym dotyczącym diagnostyki i leczenia endometriozy, prowadzonym przez Europejskie Towarzystwo Rozrodu Człowieka i Embriologii, uwzględniono zalecenie stopnia D dla stosowania ziół leczniczych w leczeniu endometriozy, to znaczy nie ma dowodów aby wspierać te terapie, ale to stowarzyszenie zaleca, aby nie wyrzucać leków ziołowych, ponieważ u niektórych kobiet, które stosowały te zioła, zauważono zmniejszenie bólu i poprawę jakości życia. Ponadto mamy fakt, że koci pazur ma już zezwolenie na jego stosowanie przez instytucje takie jak FDA (Food and Drug Administration) jako suplement diety.
Wiedza na temat endometriozy z fizjopatologią ze zmianami zapalnymi, apoptotycznymi , immunomodulujący i przeciwutleniający, dało podstawy do eksperymentalnego stosowania leków, które posiadają mechanizmy działania z niekorzystnymi skutkami wspomnianych powyżej zmian. Eksperymentalne badanie z użyciem tego ekstraktu wykazało znaczne zmniejszenie ogniska endometrium9.
Po ustaleniu, że pazur kota eksperymentalnie zmniejsza endometriozę, konieczna jest ocena mechanizmu działania Uncaria tomentosa w leczeniu tej patologii. Wśród leków powszechnie stosowanych w leczeniu endometriozy znajdują się środki antykoncepcyjne o znanym działaniu przeciw endometriozie. W ocenie hodowli in vitro tkanki guza gruczołu sutkowego (rak przewodowy naciekający, stadium II i słabo zróżnicowany) zastosowano Uncaria tomentosa i porównano z metotreksatem, gdzie zaobserwowano zmniejszenie specyficznego obszaru receptorów estrogenowych wywołane przez ten ziołolecznictwo, co cechuje działanie antykoncepcyjne wobec Uncaria tomentosa 15. W oparciu o to założenie stało się konieczne do oceny działania antykoncepcyjnego kociego pazura.
Parametr histologiczny wybrany do oceny działania antykoncepcyjnego został ustalony na podstawie badań, które obejmowały zastosowanie domięśniowego medroksy-progesteronu u szczurów z różnymi dawkami, a następnie analiza histologiczna próbki jajników i warstwy nabłonkowej macicy 12. Zostały one podzielone na trzy grupy, kontrole eksperymentalne, pozytywne i negatywne. Grupa eksperymentalna (grupa Uncaria) wykorzystała 32 mg / dzień ekstraktu Uncaria tomentosa i grupa kontroli negatywnej (grupa placebo) stosowano dziennie 1 ml soli fizjologicznej 0,9% na bazie Neto e t al.9, która wykazała znaczące zmniejszenie endometriozy bez widocznych powikłań klinicznych. Grupa kontroli pozytywnej (grupa leuprolidu) otrzymała octan leuprolidu 1 mg / kg masy ciała podany w pojedynczej dawce podskórnej, na podstawie Oktema i wsp.11, którzy ocenili stosowanie dużej dawki atorwastatyny w leczeniu endometriozy eksperymentalnej z zadowalającymi wynikami11. Octan leuprolidu jest analogiem GnRH, który ma doskonałe wyniki u kobiet z endometriozą, ale ma ograniczone zastosowanie ze względu na skutki uboczne, charakteryzujące się głównie utratą masy kostnej i dolegliwościami klimakteryjnymi14.
Analiza histologiczna jajników wykazała podobne zmiany w grupach uncaria i leuprolidy, wykazując brak atrofii ciałka żółtego i pierwotnych pęcherzyków jajnikowych w większości próbek, co sugeruje brak aktywności jajników. W ocenie histologicznej warstwy nabłonka macicy, grupy Uncaria i leuprolidy ponownie wypadły podobnie, a ich próbki wykazywały słabo proliferujące warstwy nabłonka, w przeciwieństwie do obserwowanych w grupie placebo ze wszystkimi ich próbkami w fazie proliferacyjnej. Te dane według Mukherji i Bhowmik12 są zgodne z antykoncepcją.
Wniosek
Biorąc pod uwagę wyniki badań histopatologicznych u szczurów z eksperymentalną endometriozą narażonych na ekstrakt z Uncaria tomentosa i porównane z kontrolą pozytywną i negatywną grup, sugerujemy, że znalezione zmiany są zgodne z antykoncepcją.
1. Sampson J. Endometrioza otrzewnowa spowodowana miesiączkowym rozsiewem tkanki endometrium do jamy otrzewnej. Am J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Indukcja endometriozy otrzewnowej u nagich myszy przy użyciu ludzkich unieśmiertelnionych komórek nabłonka i zrębu endometriozy: potencjalne narzędzie eksperymentalne do badania molekularnej patogenezy endometriozy u ludzi. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Związek między apoptozą a liczbą makrofagów w endometrium eutopowym u kobiet z endometriozą i bez niej. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Leczenie endometriozy. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K.Zmiany w strukturze chromosomu, aktywności mitotycznej i zawartości jądrowego DNA w komórkach Allium Test indukowane przez wyciąg wodny z kory Uncaria tomentosa ) DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Eksperymentalna redukcja endometriozy u szczurów leczonych ekstraktem z Uncaria tomentosa (pazur kota). Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Indywidualne i połączone efekty tryptoreliny i gestrinonu na eksperymentalną endometriozę u szczurów. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Zmiany histologiczne w jajniku i macicy szczura po terapii antykoncepcyjnej w postaci iniekcji Antykoncepcja 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Wyczerpanie specyficznych miejsc wiązania dla receptora estrogenowego przez Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Konflikt interesów: brak
Źródło finansowe: brak