Wprowadzenie
Transformacja to proces wprowadzania obcego DNA (np. plazmidów, BAC) do bakterii. Komórki bakteryjne, w które można transformować obce DNA, nazywane są kompetentnymi. Niektóre bakterie są z natury kompetentne (np. B. subtilis), podczas gdy inne, takie jak E. coli, nie są z natury kompetentne. Niekompetentne komórki można uczynić kompetentnymi, a następnie transformować za pomocą jednego z dwóch głównych podejść; transformacja chemiczna i elektroporacja.
Obie metody transformacji mają zalety i wady. Ogólnie transformacja chemiczna jest mniej podatna na błędy i szybsza, jednak elektroporacja daje wyższą wydajność transformacji (ułamek transformowanych komórek, które faktycznie pobierają obcy DNA). Zobacz Klonowanie, aby uzyskać pełniejsze omówienie obu podejść.
Protokoły
OpenWetWare ma już wiele protokołów związanych z transformacją bakteryjną, ale więcej jest zawsze mile widzianych.
Jeśli używasz wariantu jednego z tych protokołów, możesz dodać łącze do swojego protokołu z jednej z tych stron, aby inni użytkownicy mogli znaleźć protokół, który będzie dla nich odpowiedni. Dodatkowo, jeśli ktoś używa protokołów o wysokiej wydajności Innoe lub Hanahan, dodaj protokoły tutaj.
Transformacja chemiczna
Jeśli planujesz przeprowadzić transformację chemiczną, powinieneś zobaczyć te strony –
- Przygotowanie komórek kompetentnych chemicznie
- Przygotowanie buforu TSS
- Transformacja komórek kompetentnych chemicznie
- Przygotowanie komórek kompetentnych chemicznie (Inoue )
- Transformowanie komórek kompetentnych chemicznie (Inoue)
- TOP10 komórek kompetentnych chemicznie
Porównanie buforu do transformacji chemicznej
Ktoś powinien sprawdź roszczenia Nishimura90. tk 08:58, 25 września 2007 (EDT)
Tutaj protokół transformacji chlorku rubidu
Ktoś powinien sprawdzić deklaracje dotyczące kompetencji chemicznych 1e10 przy użyciu protokołów 10% etanolu i chlorku wapnia tutaj.
Elektroporacja
Jeśli planujesz używać elektroporacji, zapoznaj się z tymi stronami –
- Elektrokompetentne komórki
- Elektroporacja
Wszystkie abstrakty Medline: PubMed | HubMed