Inledning
Transformation är processen att införa främmande DNA (t.ex. plasmider, BAC) i en bakterie. Bakterieceller till vilka främmande DNA kan transformeras kallas kompetenta. Vissa bakterier är naturligt kompetenta (t.ex. B. subtilis), medan andra såsom E. coli inte är naturligt kompetenta. Icke-kompetenta celler kan göras kompetenta och sedan transformeras via en av två huvudmetoder; kemisk transformation och elektroporation.
Det finns fördelar och nackdelar med båda transformationsmetoderna. I allmänhet är kemisk transformation mindre benägen för fel och snabbare, men elektroporation ger en högre transformationseffektivitet (fraktion av transformerade celler som faktiskt tar upp främmande DNA). Se kloning för en mer detaljerad diskussion om båda tillvägagångssätten.
Protokoll
OpenWetWare har redan ett antal protokoll som rör bakteriell transformation men fler är alltid välkomna.
Om du använder en variant på ett av dessa protokoll är du välkommen att lägga till en länk till ditt protokoll från en av dessa sidor så att andra användare kan hitta ett protokoll som fungerar för dem. Dessutom, om någon använder Innoe eller Hanahan högeffektiva protokoll, lägg till protokoll här.
Kemisk transformation
Om du planerar att göra en kemisk transformation, bör du se dessa sidor –
- Förbereda kemiskt kompetenta celler
- Förbereda TSS-buffert
- Transformera kemiskt kompetenta celler
- Förbereda kemiskt kompetenta celler (Inoue )
- Transformera kemiskt kompetenta celler (Inoue)
- TOP10 kemiskt kompetenta celler
Jämförelse av kemisk transformation buffert
Någon borde kolla in påståenden från Nishimura90. tk 08:58, 25 september 2007 (EDT)
Transformationsprotokoll för rubidiumklorid här
Någon bör kontrollera påståenden om 1e10 kemisk kompetens med 10% etanol- och kalciumkloridprotokoll här.
Elektroporation
Om du planerar att använda elektroporation, se dessa sidor –
- Elektrokompetenta celler
- Elektroporation
Alla Medline-abstrakt: PubMed | HubMed