4 – ORIGINAL ARTIKELMODELLER, BIOLOGISK
Preventiv effekt av Uncaria tomentosa (kattklo) hos råttor med experimentell endometrios1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
Doktorsexamen, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP) och enheten för endometrios och kirurgiskt laboratorium, HU-UFMA, Maranhao, Brasilien. Designade protokollet, involverat med tekniska procedurer, ansvarig för manuskriptskrivning, ansvarig för intellektuellt och vetenskapligt innehåll i studien, övervakade alla faser av studien, gav riktlinjer för det kirurgiska ingripandet
IIGraduate student, Federal University of Maranhao (UFMA) , Brasilien. Involverad av tekniska förfaranden, ansvarig för manuskriptberedning
IIIMD, Patologiavdelningen, HU-UFMA, Maranhao, Brasilien. Makroskopiska och histopatologiska undersökningar
IVPhD, tillhörande professor, UNIFESP, Sao Paulo och chef för enheten för bäckenvärk och endometrios vid Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brasilien. Ansvarig för förvärv och tolkning av data, hjälpt till med tekniska procedurer, ge riktlinjer för kirurgiska ingrepp
Korrespondens
ABSTRAKT
SYFTE: Utvärdera de histologiska förändringarna i parenkym Epitelskiktet i livmodern och äggstockarna hos råttor med inducerad endometrios, behandlad med Uncaria tomentosa-extrakt.
METODER: 29 råttor med experimentell endometrios valdes ut och delades i tre grupper: Uncaria-gruppen fick 32 mg / ml Uncaria tomentosa-extrakt, 1 ml administrerades dagligen och placebogruppen fick 1 ml saltlösning 0,9% per dag, under i 14 dagar (båda grupperna); leuprolidgruppen fick leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvikt applicerad enstaka subkutan dos. På den 15: e behandlingsdagen avlägsnades livmoderhornet och äggstockarna för histopatologisk analys.
RESULTAT: Uncaria-gruppen presenterade nio prover (90%) med omogna äggstocksfolliklar, medan placebogruppen inte presenterade något fall och i leuprolidgruppen fanns åtta råttor (88%) med samma förändring. Placebogruppen visade mogen corpus luteum hos alla djur, och förekommer mindre frekvent i uncaria (10%) och leuprolid (22%) -grupper. Livmoderepitel visade svag proliferativ effekt i nio (90%) prover av uncaria-gruppen, hos två (20%) djur i placebogruppen och sju (77,8%) råttor i leuprolidgruppen.
SLUTSATSER: Resultaten antyder att Uncaria tomentosa har preventivmedel.
Nyckelord: Endometrios. Fytoterapi. Preventivmedel. Råttor.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32 mg / ml, administrado 1 ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1 mg / kg de peso corporal aplicado via subcutânea dose única. Ingen 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RESULTADOS: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Inledning
Endometrios är en sjukdom som kännetecknas av närvaron av vävnad som strukturellt och funktionellt liknar endometriumvävnaden utanför livmoderhålan, vilket påverkar livskvaliteten och reproduktiva patienternas kapacitet. Utvecklas vanligtvis i bäckenorganen som bukhinnan, äggstockarna, äggledarna, livmodern och fornix Douglas1,2.
Förekomsten av endometrios är så hög som cirka 10% av kvinnorna i reproduktionsåldern. Denna patologi beter sig som en östrogenrespons sjukdom med inflammatoriska och immunmodulerande aktiviteter, liksom obalans mellan cellulär apoptos och oxidativ stress2-5.
Behandlingen av endometrios kan vara kirurgisk eller klinisk, vars vanliga läkemedelsbehandling är en som stör den normala menstruationscykeln som inducerar pseudograviditet, pseudomenopaus eller kronisk anovulation, vilket ger klinisk förbättring. Effekterna är dock inte botande, med frekventa återfall, som motiverar sökandet efter nya behandlingar6.
Uncaria tomentosa, populärt känd som kattklo, tillhör Rubiaceae-familjen, som vanligen förekommer i tropiska områden i Syd- och Centralamerika. Denna växt, i form av extrakt, används i stor utsträckning av inhemska människor och används ofta som en alternativ behandling för olika sjukdomar. Studier har visat att kattens klo har antiinflammatorisk, immunmodulerande, pro-apoptotisk och antioxidant, samt preventivmedel, för att motivera ett möjligt alternativ för att behandla endometrios7,8.
Syftet med denna studie var att utvärdera de histologiska förändringarna i parenkymets epitelskikt i livmodern och äggstock från råttor med inducerad endometrios, behandlad med Uncaria tomentosa vattenhaltigt extrakt (kattklo).
Metoder
Denna experimentella studie avslutades mellan april och maj 2011 med ett urval av 40 Wistar-råttor (Rattus norvegicus albinos) vuxna, honor, jungfru, som väger mellan 180 och 250 gram med 60 dagars ålder, tillhandahållen av Bioterium vid Federal University of Maranhão (UFMA).
Denna forskning utfördes vid Experimental Surgery Laboratory vid University Hospital of the Federal University of Maranhão. Den följde den brasilianska lagstiftningen för användning av försöksdjur (Arouca-lag nr 11 794/2008) och de standarder som fastställts av Brazilian College of Animal Experimentation (COBEA), en institution ansluten till International Council for Laboratory Animal Science. Studien godkändes av djurförsöksetiska kommittén (CEEA-UEMA) under protokoll nummer 011/2011.
Djuren grupperades fem per bur i polypropen med rostfritt stålgrillskydd, som mäter 46 cm x 31 cm x 16 cm med botten täckt med träspån, byts var 48: e timme. Djuren hölls under konstanta miljöförhållanden och fick råttchow (Purina®, São Paulo, Brasilien) och vatten ad libitum sju dagar för anpassning, med brusreglering, temperatur 22 ° C ± 2 ° C, relativ fuktighet 40% 60%, 12/12 timmar ljus / mörk cykel.
Induktion av endometrios utfördes enligt metoden som föreslogs av Nogueira Neto et al.9. Efter 21 dagar sedan den första operationen genomgick råttorna ytterligare operation, vid vilken tidpunkt inventeringen av bukhålan gjordes med identifiering och mätning av autotransplantationsfokus med en digital pachymeter, följt av beräkning av volymen med hjälp av Degree Classification System of Tillväxtimplantat i enlighet med Quereda et al.10. Endast de som har utvecklat tillväxtnivå två och tre kvarstod i studien.
Råttorna delades slumpmässigt in i tre grupper. Varje djur märktes i svansen med en fyra mm permanent borste (Pilot®, São Paulo, Brasilien) och burarna identifierades. Början av sondmatning var från 22 post-kirurgisk dag av endometriosinduktion.
Grupperna delades upp enligt följande: grupp Uncaria fick sondmatning med 32 mg / ml Uncaria tomentosa-extrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brasilien), administrerades 1 ml per dag och placebogruppen fick dagligen sondmatning med 1 ml saltlösning 0,9%, båda under 14 dagar enligt Nogueira Neto et al. 9. Leuprolidgruppen fick leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvikt (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT i Brasilien) enda subkutan dos11.
Det experimentella läkemedlet består av 16 g kattkloxtrakt (Uncaria tomentosa) och 500 ml 0,9% saltlösning. Bearbetningen utfördes genom att mala 160 tabletter av 100 mg kattkloextrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) i en porslinmortel med en mortelstöt och sedan fortsätta med upplösningen av den i 500 ml 0,9% NaCl i en bägare för att blanda tills den är jämn. Blandningen framställdes under en genomsnittlig tid av 15 minuter och den totala volymen var 500 ml i suspension med en koncentration på 32 mg / ml9.
Efter avslutad behandling gjordes en ny operation och vid denna tidpunkt , inventeringen av bukhålan gjordes igen. Det återstående högra livmoderhornet och båda äggstockarna avlägsnades för histologisk utvärdering. De avlägsnade delarna rengjordes med 0,9% saltlösning och förvarades i behållare med 10% buffrat formalin, fick identifikation och vidarebefordrades till patologiavdelningen vid universitetssjukhuset vid Federal University of Maranhão. Vävnadsavsnitt gjordes och färgades med hematoxylin-eosin (HE).
Djuren i varje grupp dödades den 15: e dagen efter behandlingens början. Efter vikt har de fått 150 mg / kg natriumtiopental (Thiopental®, Crystal, St. Paul) genom intraperitoneal administrering.Läkemedlet späddes i lika stor mängd saltlösning, enligt resolution nummer 714, 20 juni 2002, Federal Council of Veterinary Medicine (CFMV). Döden karaktäriserades av hjärt-andningsstopp och fullständig frånvaro av reflexer.
Dataanalys var beskrivande, baserat på de histologiska fynden enligt Mukherji och Bhowmik12.
Resultat
Från det ursprungliga provet på 40 råttor uteslöts tio för att inte utveckla endometrios grad två och tre, och en på grund av aspiration under sondmatning. Det slutliga provet bestod av 29 råttor, uppdelade i tre grupper: uncaria och placebo, båda med tio djur; och leuprolidgrupp med nio råttor.
Gruppen som genomgår behandling med Uncaria tomentosa (Uncaria-grupp) avslöjade omogna folliklar (Tabell 1 och Figur 1) i nio fall (90%) och folliklarna med full mognad och mogna corpus luteum (tabell 2) finns i ett fall (10%).
Livmoderhistologin (tabell 3) visade svagt proliferativ endometrium (figur 2) i nio prover (90 %).
Placebo gruppen hade folliklar med full mognad och moget corpus luteum i alla fall (100%). I förhållande till endometrium var det proliferativt i åtta fall (80%).
Leuprolidgruppen hade omogna folliklar i alla prover och atrofierad corpus luteum i åtta prover (88%). Endometrium atrofierades (figur 3) i två fall (22,2%) och svagt proliferativ i sju fall (77,8%).
Diskussion
Studier med kliniska och experimentella data om användningen av medicinska örter för att behandla endometrios rapporterade att flera läkemedel med antiinflammatoriska, smärtstillande, immunmodulerande och antioxidativa egenskaper är effektiva för att bekämpa denna sjukdom. Nya kliniska studier om effektiviteten hos örter är nödvändiga för behandling av endometrios hos kvinnor13. I den meningen beaktar evidensguiden för endometriosdiagnos och behandling utförd av European Society of Human Reproduction and Embryology en rekommendationsgrad av grad D för användning av medicinska örter vid behandling av endometrios, det vill säga det finns inga bevis för att stödja dessa behandlingar, men detta samhälle rekommenderar att växtbaserade läkemedel inte kasseras eftersom det hos vissa kvinnor som använde dessa örter har märkt en minskad smärta och förbättrad livskvalitet. Dessutom har vi det faktum att kattklo redan har godkänt användning av institutioner som FDA (Food and Drug Administration) som ett kosttillskott.
Endometrioskunskapen om fysiopatologi med inflammatoriska förändringar, apoptotisk , immunmodulerande och antioxidant, gav grund för att använda droger, experimentellt, som har verkningsmekanismer med negativa effekter av dessa förändringar som nämnts ovan. En experimentell studie med användning av detta extrakt visade signifikant minskning av endometriens fokus9.
kattklo minskar endometrios experimentellt, är det nödvändigt att utvärdera Uncaria tomentosa-verkningsmekanismen för behandling av denna patologi. Bland de läkemedel som vanligtvis används för att behandla endometrios är preventivmedel, med känd verkan mot endometrios. Vid utvärderingen av in vitro-odling av brösttumörvävnaden (infiltrerande duktalt karcinom, steg II och dåligt differentierat) användes Uncaria tomentosa och jämfördes med metotrexat, där det observerades minskning i specifikt område av östrogenreceptorer orsakade av denna örtmedicin, som attribut en preventivmedel mot Uncaria tomentosa 15. Baserat på denna förutsättning har det blivit nödvändigt för att utvärdera preventiveffekten av kattens klo.
Den histologiska parameter som valts för att utvärdera preventiveffekten gjordes baserat på en studie som undersökte användningen av intramuskulärt medroxiprogesteron hos råttor med olika doser, följt av histologisk analys av äggstockarna och livmoderepitelskiktet i provet 12. De organiserades i tre grupper, experimentella, positiva och negativa kontroller. Experimentgruppen (Uncaria-gruppen) använde 32 mg / dag av Uncaria tomentosa-extrakt och den negativa kontrollgruppen (placebogruppen) användes dagligen 1 ml saltlösning 0,9% baserat på Neto e t al.9, som visade signifikant minskning av endometrios utan några kliniska komplikationer uppenbara. Den positiva kontrollgruppen (leuprolidgruppen) fick leuprolidacetat 1 mg / kg kroppsvikt applicerad enstaka subkutan dos, baserat på Oktem et al.11, som utvärderade användningen av hög dos atorvastatin vid experimentell endometrios med tillfredsställande resultat11. Leuprolidacetatet är en GnRH-analog, som har utmärkta resultat hos kvinnor med endometrios, men har begränsad användning på grund av biverkningar, som huvudsakligen kännetecknas av benförlust och klimatiska besvär14.
Histologisk analys av äggstockar visade liknande förändringar i uncaria- och leuprolidgrupper, vilket visade frånvaro av atrofi hos corpus luteum och primära äggstocksfolliklar, i de flesta prover, vilket tyder på frånvaro av äggstocksaktivitet. Vid histologisk utvärdering av livmoderepitelskiktet utförde Uncaria- och leuprolidgrupper igen liknande, med deras prover visade svagt proliferativa epitelskikt, i motsats till det som observerades i placebogruppen med alla deras prover i den proliferativa fasen. Dessa data enligt Mukherji och Bhowmik12 är kompatibla med preventivmedel.
Slutsats
Med tanke på histopatologiska fynd hos råttor med experimentell endometrios exponerad för extraktet av Uncaria tomentosa och jämfört med positiv och negativ kontroll grupper, föreslår vi att de hittade ändringarna är kompatibla med preventivmedel.
1. Sampson J. Peritoneal endometrios på grund av menstruationsspridning av endometriell vävnad i bukhålan. Am J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Induktion av peritoneal endometrios i nakna möss med användning av humana odödliga endometriosepitelceller och stromalceller: ett potentiellt experimentellt verktyg för att studera molekylär patogenes av endometrios hos människa. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Förhållandet mellan apoptos och antalet makrofager i eutopiskt endometrium från kvinnor med och utan endometrios. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Behandling av endometrios. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K. Förändringar i kromosomstruktur, mitotisk aktivitet och nukleärt DNA-innehåll från celler i Allium Test inducerad av barkvattenextrakt av Uncaria tomentosa (vild ) DC. J etnofarmakol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Experimentell endometriosreduktion hos råttor behandlade med Uncaria tomentosa (kattklo) Extrakt. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Individuella och kombinerade effekter av triptoreline och gestrinon på experimentell endometrios hos råtta. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologiska förändringar i äggstockarna och livmodern hos råtta efter injicerbar preventivmedelsterapi. Preventivmedel 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Utarmning av specifika bindningsställen för östrogenreceptor av Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Intressekonflikt: ingen
Ekonomisk källa: ingen