4 – ORIGINAL ARTIKELMODELLER, BIOLOGISK
Kontraceptiv virkning af Uncaria tomentosa (kattens klo) hos rotter med eksperimentel endometriose1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow ph.d.-grad, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP) og Unit of Endometriosis and Surgical Laboratory, HU-UFMA, Maranhao, Brazil. Designede protokollen, involveret i tekniske procedurer, ansvarlig for manuskriptskrivning, ansvarlig for intellektuelt og videnskabeligt indhold i undersøgelsen, overvågede alle faser af undersøgelsen, gav retningslinjer for det kirurgiske indgreb
IIGraduate student, Federal University of Maranhao (UFMA) , Brasilien. Involveret med tekniske procedurer, ansvarlig for manuskriptforberedelse
IIIMD, Patologisk afdeling, HU-UFMA, Maranhao, Brasilien. Makroskopiske og histopatologiske undersøgelser
IVPhD, tilknyttet professor, UNIFESP, Sao Paulo og enhedschef for Pelvic Pain and Endometriosis of Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brasilien. Ansvarlig for indsamling og fortolkning af data, hjulpet med tekniske procedurer, give retningslinjer for kirurgiske indgreb
Korrespondance
ABSTRAKT
FORMÅL: Evaluer de histologiske ændringer i parenkym ´s epitellag i livmoderen og æggestokkene hos rotter med induceret endometriose, behandlet med Uncaria tomentosa ekstrakt.
METODER: 29 rotter med eksperimentel endometriose blev udvalgt og opdelt i tre grupper: Uncaria-gruppen modtog 32 mg / ml Uncaria tomentosa-ekstrakt, 1 ml administreret dagligt, og placebogruppen modtog 1 ml saltvand 0,9% pr. dag i løbet af 14 dage (begge grupper) leuprolidgruppen modtog leuprolidacetat 1 mg / kg legemsvægt anvendt enkelt subkutan dosis. På den 15. behandlingsdag blev livmoderhornet og æggestokkene fjernet til histopatologisk analyse.
RESULTATER: Uncaria-gruppen præsenterede ni prøver (90%) med umodne ovariefollikler, mens placebogruppen ikke præsenterede noget tilfælde, og i leuprolidgruppen var der otte rotter (88%) med samme ændring. Placebogruppen viste modent corpus luteum hos alle dyr, der forekommer mindre hyppigt i uncaria (10%) og leuprolid (22%) grupper. Livmoderepitel viste svag proliferativ effekt i ni (90%) prøver af uncaria-gruppen hos to (20%) dyr i placebogruppen og syv (77,8%) rotter i leuprolidgruppen.
KONKLUSIONER: Resultaterne antyder, at Uncaria tomentosa har prævention.
Nøgleord: Endometriose. Fytoterapi. Svangerskabsforebyggelse. Rotter.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32 mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1 mg / kg de peso corporal aplicado via subcutânea dosis única. Ingen 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RESULTADOS: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Introduktion
Endometriose er en sygdom, der er kendetegnet ved tilstedeværelsen af væv, der strukturelt og funktionelt ligner endometriumvævet uden for livmoderhulen, hvilket påvirker livskvaliteten og reproduktive patienters kapacitet. Normalt udvikler sig i bækkenorganerne, såsom bughinden, æggestokkene, æggelederne, livmoderen og fornix Douglas1,2.
Forekomsten af endometriose er så høj som omkring 10% af kvinderne i reproduktiv alder. Denne patologi opfører sig som en østrogenresponsiv sygdom med inflammatoriske og immunmodulatoriske aktiviteter samt ubalance mellem cellulær apoptose og oxidativ stress2-5.
Behandlingen af endometriose kan være kirurgisk eller klinisk, hvis sædvanlige medicinbehandling er en, der interfererer med den normale menstruationscyklus, der inducerer pseudograviditet, pseudomenopause eller kronisk anovulation, hvilket giver klinisk forbedring. Virkningerne er imidlertid ikke helbredende med hyppige gentagelser, som berettiger søgningen efter nye behandlinger6.
Uncaria tomentosa, populært kendt som katteklo, tilhører familien Rubiaceae, der almindeligvis findes i tropiske områder af Syd- og Mellemamerika. Denne plante i form af ekstrakt bruges i vid udstrækning af indfødte og bruges ofte som en alternativ behandling for forskellige sygdomme. Undersøgelser har vist, at kattens klo har antiinflammatorisk, immunmodulatorisk, pro-apoptotisk og antioxidant såvel som svangerskabsforebyggende virkning for at retfærdiggøre et muligt alternativ til behandling af endometriose7,8.
Formålet med denne undersøgelse var at evaluere de histologiske ændringer i parenkymets epitelag i livmoderen og ovarie hos rotter med induceret endometriose, behandlet med vandigt ekstrakt Uncaria tomentosa (kattens klo).
Metoder
Denne eksperimentelle undersøgelse blev afsluttet mellem april og maj 2011 med en prøve på 40 Wistar-rotter (Rattus norvegicus albinos) voksne, hunner, jomfru, der vejer mellem 180 og 250 gram med 60 dages alder, leveret af Bioterium fra Federal University of Maranhão (UFMA).
Denne forskning blev udført ved Experimental Surgery Laboratory ved University Hospital of the Federal University of Maranhão. Den fulgte den brasilianske lovgivning for brug af forsøgsdyr (Arouca-lov nr. 11.794 / 2008) og de standarder, der blev fastsat af det brasilianske kollegium for dyreforsøg (COBEA), en institution tilknyttet Det Internationale Råd for dyreforskning. Undersøgelsen blev godkendt af Animal Experimentation Ethics Committee (CEEA-UEMA) under protokol nummer 011/2011.
Dyrene blev grupperet fem pr. Polypropylenbur med grilldæksel i rustfrit stål, der måler 46 cm x 31 cm x 16 cm med bunden dækket af træspåner, skiftes hver 48. time. Dyrene blev holdt under konstante miljøbetingelser, idet de modtog rotte-chow (Purina®, São Paulo, Brasilien) og vand ad libitum syv dage til tilpasning med støjkontrol, temperatur 22 ° C ± 2 ° C, relativ fugtighed 40% 60%, 12/12 timer lys / mørk cyklus.
Induktion af endometriose blev udført i henhold til den metode, der blev foreslået af Nogueira Neto et al.9. Efter 21 dage siden den første operation gennemgik rotterne yderligere operation, på hvilket tidspunkt blev der foretaget en oversigt over peritoneal hulrum med identifikation og måling af autotransplantationsfokus med et digitalt pachymeter efterfulgt af beregning af volumen ved anvendelse af gradsklassificeringssystemet for Vækstimplantater i overensstemmelse med Quereda et al.10. Kun dem, der har udviklet vækstniveau to og tre, forblev i undersøgelsen.
Rotterne blev tilfældigt opdelt i tre grupper. Hvert dyr blev mærket på halen med fire mm permanent børste (Pilot®, São Paulo, Brasilien), og burene blev identificeret. Begyndelsen af sonde var fra 22 post-kirurgisk dag med endometrioseinduktion.
Grupperne blev opdelt som følger: gruppe Uncaria modtog sonde med 32 mg / ml Uncaria tomentosa-ekstrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil), administreret 1 ml pr. Dag, og placebogruppen modtog daglig sondeoverføring med 1 ml saltvand 0,9%, begge i 14 dage ifølge Nogueira Neto et al. 9. Gruppen leuprolid modtog leuprolidacetat 1 mg / kg legemsvægt (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT i Brasilien) enkelt subkutan dosis11.
Det eksperimentelle lægemiddel består af 16 g kattekloekstrakt (Uncaria tomentosa) og 500 ml 0,9% saltopløsning. Behandlingen blev udført ved formaling af 160 tabletter af 100 mg kattekloekstrakt (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) i en porcelænsmørtel med en pistil og derefter fortsat med opløsningen af den i 500 ml 0,9% NaCl i et bægerglas til blanding indtil glat. Blandingen blev fremstillet på et gennemsnitstid på 15 minutter, og det samlede volumen var 500 ml i suspension med en koncentration på 32 mg / ml9.
Efter afslutningen af behandlingen blev der foretaget en ny operation, og på dette tidspunkt blev opgørelsen af peritonealhulen foretaget igen. Det resterende højre uterinhorn og begge æggestokke blev fjernet til histologisk evaluering. De fjernede dele blev renset med 0,9% saltopløsning og opbevaret i beholder med 10% bufret formalin, modtaget identifikation og videresendt til patologiafdelingen ved universitetshospitalet ved Federal University of Maranhão. Vævsafsnit blev lavet og farvet med hæmatoxylin-eosin (HE).
Dyrene i hver gruppe blev dræbt på den 15. dag efter behandlingens begyndelse. Efter vægt har de fået 150 mg / kg natriumthiopental (Thiopental®, Crystal, St. Paul) gennem intraperitoneal administration.Lægemidlet blev fortyndet i lige så stort saltvand i henhold til resolution nr. 714, 20. juni 2002, Federal Council of Veterinary Medicine (CFMV). Døden var karakteriseret ved kardio-respiratorisk anholdelse og fuldstændigt fravær af reflekser.
Dataanalyse var beskrivende baseret på de histologiske fund ifølge Mukherji og Bhowmik12.
Resultater
Fra den oprindelige prøve på 40 rotter blev ti udelukket for ikke at udvikle endometriose grad to og tre og en på grund af aspiration under sondeoverfladen. Den endelige prøve blev sammensat til 29 rotter, opdelt i tre grupper: uncaria og placebo, begge med ti dyr; og leuprolidgruppe med ni rotter.
Gruppen, der gennemgår behandling med Uncaria tomentosa (Uncaria-gruppe), afslørede umodne follikler (tabel 1 og figur 1) i ni tilfælde (90%), og folliklerne med fuld modning og moden corpus luteum (tabel 2) er til stede i et tilfælde (10%).
Uterushistologien (tabel 3) viste svagt proliferativ endometrium (figur 2) i ni prøver (90 %).
Placebo gruppen havde follikler med fuld modning og modent corpus luteum i alle tilfælde (100%). I forhold til endometrium var det proliferativ i otte tilfælde (80%).
Leuprolidgruppen havde umodne follikler i alle prøver og atrofieret corpus luteum i otte prøver (88%). Endometrium blev atrofieret (figur 3) i to tilfælde (22,2%) og svagt proliferativ i syv tilfælde (77,8%).
Diskussion
Undersøgelser med kliniske og eksperimentelle data om brugen af medicinske urter til behandling af endometriose rapporterede, at adskillige lægemidler med antiinflammatoriske, analgetiske, immunmodulatoriske og antioxidantegenskaber er effektive til bekæmpelse af denne sygdom. Nye kliniske undersøgelser af effektiviteten af urter er nødvendige til behandling af endometriose hos kvinder13. I denne forstand overvejer evidensvejledningen til endometriose-diagnosen og -behandlingen foretaget af European Society of Human Reproduction and Embryology en anbefaling af grad D til brug af medicinske urter til behandling af endometriose, dvs. der er ingen beviser for at støtte disse behandlinger, men dette samfund anbefaler, at urtemedicin ikke kasseres, fordi der hos nogle kvinder, der brugte disse urter, er blevet bemærket et fald i smerter og forbedret livskvalitet. Derudover har vi det faktum, at kattens klo allerede har godkendt brugen af institutioner som FDA (Food and Drug Administration) som et kosttilskud.
Endometriose-viden om fysiopatologi med inflammatoriske ændringer, apoptotisk , immunmodulatorisk og antioxidant, gav grundlag for at anvende lægemidler, eksperimentelt, der besidder virkningsmekanismer med ugunstige virkninger af disse ændringer nævnt ovenfor. En eksperimentel undersøgelse med dette ekstrakt viste en signifikant reduktion af endometriefokus9.
Når det blev fastslået, at kattens klo reducerer endometriose eksperimentelt, er det nødvendigt at evaluere Uncaria tomentosa-handlingsmekanismen til behandling af denne patologi. Blandt de lægemidler, der almindeligvis anvendes til behandling af endometriose, er præventionerne med kendt virkning mod endometriose. Ved evalueringen af in vitro-kultur af brysttumorvæv (infiltrerende duktalt carcinom, trin II og dårligt differentieret) blev der anvendt Uncaria tomentosa og sammenlignet med methotrexat, hvor det blev observeret fald i det specifikke område af østrogenreceptorer forårsaget af denne urtemedicin, som attributter en svangerskabsforebyggende handling mod Uncaria tomentosa 15. Baseret på denne forudsætning er det blevet nødvendigt at evaluere den svangerskabsforebyggende virkning af kattens klo.
Den histologiske parameter, der blev valgt til at evaluere svangerskabsforebyggende virkning, blev foretaget på baggrund af en undersøgelse, der undersøgte brugen af intramuskulær medroxy-progesteron hos rotter med forskellige doser efterfulgt af histologisk analyse af æggestokke og uterusepitellag i prøven 12. De blev organiseret i tre grupper, eksperimentel, positiv og negativ kontrol. Eksperimentel gruppe (Uncaria-gruppe) anvendte 32 mg / dag Uncaria tomentosa-ekstrakt og den negative kontrolgruppe (placebogruppe) anvendt dagligt 1 ml saltvand 0,9% baseret på Neto e t al.9, som viste signifikant reduktion af endometriose uden nogen kliniske komplikationer. Den positive kontrolgruppe (leuprolidgruppe) modtog leuprolidacetat 1 mg / kg legemsvægt anvendt enkelt subkutan dosis, baseret på Oktem et al.11, som evaluerede brugen af høj dosis atorvastatin på eksperimentel endometriose med tilfredsstillende resultater11. Leuprolidacetatet er en GnRH-analog, som har fremragende resultater hos kvinder med endometriose, men har begrænset anvendelse på grund af bivirkninger, hovedsageligt karakteriseret ved knogletab og klimatiske klager14.
Histologisk analyse af æggestokke viste lignende ændringer i uncaria- og leuprolidgrupper, der viste fravær af atrofi af corpus luteum og primære ovariefollikler i de fleste prøver, hvilket antyder fravær af ovarieaktivitet. Ved histologisk evaluering af det uterine epitellag udførte Uncaria- og leuprolidgrupper igen ens, med deres prøver viste svagt proliferative epitelag i modsætning til det, der blev observeret i placebogruppen med alle deres prøver i den proliferative fase. Disse data ifølge Mukherji og Bhowmik12 er kompatible med prævention.
Konklusion
I betragtning af de histopatologiske fund hos rotter med eksperimentel endometriose udsat for ekstraktet af Uncaria tomentosa og sammenlignet med positiv og negativ kontrol grupper, foreslår vi, at de fundne ændringer er kompatible med prævention.
1. Sampson J. Peritoneal endometriose på grund af menstruationsformidling af endometrievæv i bughulen. Am J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Induktion af peritoneal endometriose i nøgne mus ved anvendelse af humane udødeliggjorte endometrioseepitelceller og stromaceller: et potentielt eksperimentelt værktøj til at studere molekylær patogenese af endometriose hos mennesker. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Forholdet mellem apoptose og antallet af makrofager i eutopisk endometrium fra kvinder med og uden endometriose. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Behandling af endometriose. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K. Ændringer i kromosomstruktur, mitotisk aktivitet og nukleart DNA-indhold fra celler fra Allium Test induceret af barkvandekstrakt af Uncaria tomentosa (Wild DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Eksperimentel reduktion af endometriose hos rotter behandlet med Uncaria tomentosa (kattens klo) Ekstrakt. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Individuelle og kombinerede effekter af triptoreline og gestrinon på eksperimentel endometriose i rotte. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologiske ændringer i æggestokken og livmoderen hos rotter efter injicerbar svangerskabsforebyggende behandling. Prævention. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Udtømning af specifikke bindingssteder for østrogenreceptor af Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Interessekonflikt: ingen
Finansiel kilde: ingen