Introduktion
Transformation er processen med at introducere fremmed DNA (f.eks. plasmider, BAC) i en bakterie. Bakterieceller, hvori fremmed DNA kan transformeres, kaldes kompetente. Nogle bakterier er naturligt kompetente (fx B. subtilis), mens andre såsom E. coli ikke er naturligt kompetente. Ikke-kompetente celler kan gøres kompetente og derefter transformeres via en af to hovedtilgange; kemisk transformation og elektroporation.
Der er fordele og ulemper ved begge transformationsmetoder. Generelt er kemisk transformation mindre tilbøjelig til fejl og hurtigere, men elektroporation giver dog en højere transformationseffektivitet (brøkdel af transformerede celler, der faktisk optager det fremmede DNA). Se kloning for en mere detaljeret diskussion af begge tilgange.
Protokoller
OpenWetWare har allerede et antal protokoller, der vedrører bakterietransformation, men flere er altid velkomne.
Hvis du bruger en variant på en af disse protokoller, er du velkommen til at tilføje et link til din protokol fra en af disse sider, så andre brugere kan finde en protokol, der fungerer for dem. Hvis nogen derudover bruger Innoe- eller Hanahan-effektivitetsprotokollerne, skal du tilføje protokoller her.
Kemisk transformation
Hvis du planlægger at foretage en kemisk transformation, skal du se disse sider –
- Forberedelse af kemisk kompetente celler
- Forberedelse af TSS-buffer
- Transformering af kemisk kompetente celler
- Forberedelse af kemisk kompetente celler (Inoue )
- Transformering af kemisk kompetente celler (Inoue)
- TOP10 kemisk kompetente celler
Sammenligning af kemisk transformation buffer
Nogen skal tjek kravene fra Nishimura90. tk 25. september 2007 (EDT) 08:58
Transformationsprotokol for Rubidiumchlorid her
Nogen bør kontrollere påstandene om 1e10 kemisk kompetence ved hjælp af 10% ethanol og calciumchloridprotokoller her.
Elektroporation
Hvis du planlægger at bruge elektroporation, skal du se disse sider –
- Elektrocompetente celler
- Elektroporation
Alle Medline-abstracts: PubMed | HubMed