Bevezetés
A transzformáció az idegen DNS (pl. plazmidok, BAC) baktériumba történő bejuttatásának folyamata. Azokat a baktériumsejteket, amelyekbe idegen DNS átalakulhat, kompetensnek nevezünk. Egyes baktériumok természetesen kompetensek (pl. B. subtilis), míg mások, mint például az E. coli, természetesen nem kompetensek. A nem kompetens sejtek kompetenciává tehetők, majd a két fő megközelítés egyikével transzformálhatók; kémiai átalakulás és elektroporáció.
Mindkét transzformációs módszernek vannak előnyei és hátrányai. Általában a kémiai átalakulás kevésbé hajlamos a tévedésre és gyorsabb, azonban az elektroporáció magasabb transzformációs hatékonyságot eredményez (az idegen DNS-t ténylegesen felvevő transzformált sejtek frakciója). Lásd a Klónozás című témakört, ha mindkét megközelítésről részletesebb vitát szeretne kapni.
Protokollok
Az OpenWetWare-nek már számos protokollja van a baktériumok transzformációjával kapcsolatban, de további programokat mindig szívesen látunk. ha ezeknek a protokolloknak az egyik változatát használja, kérjük, bátran adjon hozzá egy linket a protokolljához ezen oldalak egyikéről, hogy a többi felhasználó megtalálja a számára megfelelő protokollt. Ezenkívül, ha valaki az Innoe vagy a Hanahan nagy hatékonyságú protokollokat használja, kérjük, adja hozzá a protokollokat.
Kémiai átalakítás
Ha kémiai átalakítást tervez, akkor ezeket látnia kell. oldalak –
- kémiailag kompetens sejtek előkészítése
- TSS puffer előkészítése
- kémiailag kompetens sejtek transzformálása
- kémiailag kompetens sejtek előkészítése (Inoue )
- Transzformáló kémiailag kompetens sejtek (Inoue)
- TOP10 kémiailag kompetens sejtek
Kémiai transzformációs puffer összehasonlítása
Valakinek nézze meg Nishimura90 igényeit. tk 2007. szeptember 25, 08:58 (EDT)
A rubídium-klorid transzformációs protokoll itt
Valakinek ellenőriznie kell az 1e10 kémiai kompetencia állításait 10% -os etanol- és kalcium-klorid-protokollok használatával itt.
Elektroporáció
Ha az elektroporáció használatát tervezi, akkor nézze meg ezeket az oldalakat –
- Elektrokompetens cellák
- Elektroporáció
Az összes Medline kivonat: PubMed | HubMed