Ismerje meg laboratóriumát

• Magas koncentrációjú antitestek jelenléte (titer > 1: 640) gyanússá teheti az autoimmun rendellenességet. ajándék. Ebben a forgatókönyvben azt javaslom, hogy a szérumokat ezután teszteljék a dsDNS, Sm, RNP, Ro (SS-A), La (SS-B) és talán Scl-70 antitestek ellen. Ezek bármelyikének antitestjeinek jelenléte nagymértékben növeli annak valószínűségét, hogy a beteg SLE, MCTD, Sjögren vagy scleroderma. Néhány laboratórium automatikusan teszteli ezeket az antitesteket, amikor az ANA szűrés pozitív. Ezen ellenanyagok jelenléte azonban nem diagnosztizálja a betegséget. Ha nem lehet kezdeti diagnózist felállítani, az a gyakorlatom, hogy idővel gondosan figyelemmel kísérem a beteget egy ANA-val összefüggő betegség kialakulására, és évente legalább kétszer látom a beteget.
• Az alacsony titerek kombinációja antitest (< 1:80), és a betegség hiánya vagy csak néhány jele vagy tünete jóval kisebb valószínűséggel utal egy autoimmun betegségre. Ennek eredményeként ezeket az alacsony ANA-titerű betegeket ritkábban kell átértékelni – évente, hacsak a klinikai tünetek nem jelennek meg autoimmun betegségre utalóan.
• A negatív ANA-val rendelkező betegnek nagy valószínűséggel nincs sem SLE-je, sem MCTD-je. , Sjögren vagy szkleroderma. Azonban, ha még mindig erős klinikai bizonyíték áll fenn egy szisztémás autoimmun rendellenességre, tesztelhetjük a kettős szálú (ds) DNS, Sm, RNP, Ro, La vagy Scl-70 specifikus antitestjeit, bár tapasztalatom szerint jellemzően negatívak. Mindazonáltal körültekintő olyan betegeket látni, ahol legalább évente magas a gyanú klinikai indexe – bár gyakrabban, ha klinikailag indokolt.
• Az antinukleáris antitestek a festési minták széles skáláját eredményezik (homogén, diffúz , periféria, perem, foltos, nukleoláris, anticentromere stb.). A nukleáris festési mintának viszonylag alacsony érzékenysége és specificitása van a különböző autoimmun rendellenességek esetén. A specifikus nukleáris antigénekre irányított antitestek jelenléte általában hasznosabb. (Ezek az antitestek a következőket tartalmazzák: dsDNS, Sm, RNP, Ro, La vagy Scl-70.)

Az elmúlt években a kutatók és a biotechnológiai cégek szilárd fázisú immunvizsgálatok az IF ANA teszt helyettesítésére.4-23 A kísérlet mögött meghúzódó indoklás az IF technika teljesítményjellemzőihez kapcsolódik. Ez a teszt nagyon munkaigényes, és változhat a technikusok eltérő értelmezése miatt. Ugyancsak bonyolítja a tesztet a kép elhalványulása, mivel azt fluoreszcens mikroszkóppal vizsgálják. Ezenkívül az IF technika a páciens szérumainak sorozatos hígítását használja, amely eredmények nem feltétlenül lineárisak. A titer kétszeres eltérései gyakoriak az ugyanazon mintán végzett napi vizsgálatok során; a négyszeres különbségekről azt mondják, hogy “jelentősek”. Ezzel szemben a szilárd fázisú immunvizsgálatok automatizáltak és jól reprodukálhatók. Az eredmények lineárisak, a technika kevésbé munkaigényes, és így olcsóbban elvégezhető.

Ezen megfontolások miatt gazdasági megtakarításoknak kell lenniük. szilárd fázisú immunvizsgálatot alkalmazva egy ANA kvantitatív meghatározásához. Tehát a szilárd fázisú ANA immunvizsgálatok kifejlesztésére tett kísérlet során számos csoport a szilárd fázisra helyezte azokat az antigéneket, amelyeket általában a specifikusabb ANA immunvizsgálatokban vizsgálnak (pl. DNS, Sm, RNP, Ro / SSA, La / SSB, nukleoprotein, sejtkivonatok stb.). Közzétett jelentésekben az ANA-titerek és ezek a szilárd fázisú vizsgálatok közötti korrelációs együttható meglehetősen jó. Ezért sok kereskedelmi cég váltotta meg ANA-ját ezekre a szilárd fázisú immunvizsgálatokra.4-23 Aggodalomra ad okot azonban a hamis-negatív eredmények magas gyakorisága / százaléka ismert SLE-ben és hasonló betegségekben szenvedő betegeknél, valamint a “hamis pozitívok” továbbra is magas gyakorisága (pl. pozitív ANA valakiben SLE nélkül) ezekben a vizsgálatokban.15-21 További munkára van szükség ezen szilárd fázisú immunvizsgálatok érzékenységének és különösen specifitásának javítása érdekében annak biztosítása érdekében, hogy az SLE-t és a kapcsolódó betegségeket szenvedő betegeket ne hagyják ki ezek a szilárd fázisú immunvizsgálatok.

DNS antitestek

A DNS antitestek elsősorban azokra oszthatók, amelyek egyszálú (s) DNS-sel reagálnak, és azokra, amelyek felismerik a dsDNS-t. 24-26

Anti- ssDNS antitestekről beszámoltak SLE-ben, rheumatoid arthritisben, a gyógyszerrel összefüggő lupusban, az SLE-ben szenvedő betegek egészséges hozzátartozóiban és ritkábban más reumás betegségekben. (Lásd: 2. táblázat, 17. oldal.) Tehát az anti-ssDNS korlátozottan alkalmazható az SLE vagy más reumatikus betegségek diagnosztizálásában. Az anti-ssDNS nem korrelál jól a betegség aktivitásával, ezért nem hasznos a betegség kezelésében.

A dsDNS elleni antitesteket leggyakrabban szilárd fázisú immunvizsgálatokkal detektálják, de néhány laboratóriumban a crithidia IF assay vagy esetenként a Farr radioimmunassay.A legtöbb kórházi és kereskedelmi laboratórium csak egyet végez. A Farr-vizsgálat valószínűleg a legmagasabb specificitással és a SLE diagnosztizálásához szükséges három vizsgálat közül a legkisebb érzékenységgel rendelkezik, míg a szilárd fázisú vizsgálatok a legmagasabb érzékenységgel és a legalacsonyabb specificitással rendelkeznek; a crithidia assay esik. A Farr-vizsgálatnak az is hátránya, hogy radioaktív anyagokat használ, amelyek a legtöbb laboratóriumban kerülik el, és a crithidia teszt nagyon munkaigényes. Inkább az ELISA-vizsgálatot használom mindennapi használatra.

Az anti-dsDNS specifikus (95%), bár nem túl érzékeny (70%) az SLE-re, így pozitívan használható diagnózis esetén. , 17. o.) Alkalmanként más állapotokban is megtalálhatók, beleértve a reumás ízületi gyulladást, a fiatalkori ízületi gyulladást, a gyógyszer által kiváltott lupuszt, az autoimmun hepatitist és még normális embereknél is.

Az anti-dsDNS antitestek titerei gyakran ingadoznak betegség aktivitással, különösen lupus nephritisrel, és ezért sok beteg számára hasznosak az SLE lefolyásának követésére. Ha a páciens titere emelkedik vagy nagyon magas, de klinikailag nyugodt, akkor nem kezelem a szerológiai rendellenességeket, hanem figyelmeztető jelnek tartom, hogy a beteget szorosabban kell követni és kezelni, ha klinikailag történik valami, ami a változás a terápiában. Egyes kutatók azonban kezelték ezeket a szerológiai rendellenességeket (különösen, ha alacsony a komplement szintje), és javított klinikai eredményekről számoltak be. Ezzel ellentétben, használok egy csökkenő titeret olyan személynél, aki a kezelés alatt fellángoló fellángolás után javul, útmutatóként a kezelés csökkentésében (pl. Kortikoszteroidok és / vagy immunszuppresszív szerek).

Az anti-dsDNS antitestek és más antitestek közötti összefüggés az SLE betegség megnyilvánulásai sokkal kevésbé egyértelműek. Például nincs összefüggés az anti-dsDNS-titer és a neuropszichiátriai SLE betegség aktivitása között.

Az aktív lupus megnyilvánulásainak megkülönböztetése a gyógyszerek fertőző szövődményeitől vagy toxikus hatásaitól – és a nem kapcsolódó betegségektől – mindig kihívást jelent. Az anti-dsDNS antitestek jelenléte néhány betegnél hasznos lehet e megkülönböztetéshez. (anti-RNP) leggyakrabban szilárd fázisú immunvizsgálatokkal detektálhatók. 24,27

Az SLE-ellenes antitestek az SLE-ben szenvedő betegek csak 10-40% -ában találhatók, de nagyon ritkán fordulnak elő egyéb feltételek (azaz nem érzékenyek, de nagyon specifikusak). Az anti-Sm titerek mérése diagnosztikailag hasznos lehet, különösen akkor, amikor az anti-DNS antitestek nem mutathatók ki. Az anti-Sm viszonylag alacsony érzékenysége miatt azonban a negatív érték semmiképpen sem zárja ki az SLE diagnosztizálását. nem specifikusak az SLE-re, mivel az MCTD meghatározó jellemzője. Ezek az antitestek alacsony titerekben és alacsony gyakorisággal is előfordulhatnak más reumatikus betegségek, például RA és scleroderma esetén. (Lásd: 2. táblázat, 17. oldal.)

Sem az anti-Sm, sem az anti-RNP antitestek titerje (szintje) nem korrelál semmilyen klinikai aktivitással.

Anti-Ro / SSA és Anti-La / SSB antitestek

Az Ro / SSA és La / SSB antitesteket leggyakrabban szilárd fázisú immunvizsgálatokkal detektálják. 28,29 Anti-Ro / SSA és anti-La / SSB magas gyakorisággal Sjögren-szindrómás betegeknél és SLE-ben, de fényérzékeny dermatitiszben szenvedő betegeknél is, valamint az egészséges felnőttek 0,1–0,5% -ánál.

Anti-Ro / SSA antitestek körülbelül 50% -ban találhatók meg az SLE-s betegek körében. (Lásd a 2. táblázatot, 17. o.) Fényérzékenységgel, szubakut bőr lupusszal, bőr vasculitisszel (tapintható purpura), intersticiális tüdőbetegséggel, újszülöttkori lupusszal és veleszületett szívblokkal társultak. Az anti-Ro / SSA antitestek a primer Sjögren-szindrómában szenvedő betegek körülbelül 75% -ában találhatók (lásd: 2. táblázat, 17. o.), És ezen antitestek magas titerje a mirigy extra tulajdonságainak, különösen a purpurának és a vasculitisnek nagyobb előfordulásával jár. Ezzel szemben Ro / SSA antitestek csak a reumás ízületi gyulladással járó másodlagos Sjögren-szindrómában szenvedő betegek 10–15% -ában vannak jelen. Ezért Ro / SSA vagy anti-La / SSB antitestek jelenléte gyaníthatóan primer Sjögren-szindrómában szenvedő betegeknél erősen alátámasztja a diagnózist.

Az anti-Ro antitesttel rendelkező SLE-ben szenvedő betegek körülbelül 50% -a anti -La antitest, szorosan rokon RNS-fehérje antigén. Hasonlóképpen, a legtöbb Sjögren-szindrómás beteg is rendelkezik anti-La (SSB) antitestekkel. Rendkívül ritka olyan betegeket találni, akik anti-La antitestekkel rendelkeznek anti-Ro antitestek nélkül.

Véleményem szerint az anti-Ro / SSA és anti-La / SSB antitest tesztek elrendelésének indikációi a következők:

• SLE-s nők, akik terhesek vagy a jövőben teherbe eshet;
• nők, akiknek kórtörténetében szívblokk vagy szívizomgyulladással küzdő gyermek született;
• betegek, akiknek kórtörténetében megmagyarázhatatlan fényérzékeny bőrkitörések voltak;
• Azok a betegek, akiknek erősen gyanúja van SLE-ről, de akiknek ANA-tesztje negatív vagy
• xerostomia, keratoconjunctivitis sicca és / vagy nyál- és könnymirigy-megnagyobbodás tüneteiben szenvedő betegek.

Antiribosomális P fehérje antitestek

Anti- riboszomális P fehérje antitesteket az Egyesült Államokban az SLE-ben szenvedő betegek 10-20% -ában és az SLE-ben szenvedő ázsiai betegek 40-50% -ában detektáltak, de ritkán más reumatikus betegségekben .30 A ribosomális P-protein antitestek erősen lehetnek specifikus a lupusszal társult pszichózisra, bár nem minden tanulmány igazolta ezt. A lupusban szenvedő betegek depresszióját, valamint a vese- és májelzáródást néhány kisebb vizsgálatban az anti-ribosomális P-fehérje antitestekkel is összefüggésbe hozták.

Az alacsony érzékenység és a rossz klinikai összefüggés miatt sok kutató – köztük én is – kevés klinikai hasznosság ebben a tesztben.

Centromere-ellenes antitestek

Az anti-centromer antitestek (ACA-k) szinte kizárólag korlátozott bőrszisztémás szklerózisban (lcSSc) szenvedő betegeknél találhatók meg, különösen azoknál, akik CREST.31 Az ACA-kat a CREST-ben szenvedő betegek 57% -ánál figyelték meg, de más betegségben szenvedő betegeknél is, köztük egyeseknél, akik csak Raynaud-jelenségben szenvedtek. Az ACA-kat tipikusan a Hep-2 sejtek jellegzetes IF mintázata detektálja.

Anti-Scl-70 (topoizomeráz-1) antitestek

A scleroderma betegek kb. 15-20% -a antitestjei vannak egy 70 kd fehérjéhez (topoizomeráz-1), amelyet később Scl-70.31-nek neveznek. A kimutatás szokásos módszere ELISA. Ezen antitestek jelenléte úgy tűnik, hogy növeli a tüdőfibrózis kockázatát a sclerodermában szenvedő betegek körében, és meglehetősen specifikus a betegségre.

Összefoglalás

Ha az anamnézis, a fizikai vizsgálat és a teljes vérkép (pl. leukopenia, thrombocytopenia) ANA-tesztet igényel. Ha negatív, akkor nagyon valószínűtlen, hogy a beteg SLE-ben szenved, és a beteg megnyugodhat. Ha a titer < 1: 160, az SLE valószínűtlen, és a beteg megnyugodhat arról, hogy az SLE valószínűtlen, de a beteget időszakosan követni kell. A ≥1: 160 titer növeli az SLE és a kapcsolódó rendellenességek valószínűségét. Fontos azonban megjegyezni, hogy a pozitív ANA-val rendelkező egyének 85% -ának nincs SLE-je. Ha az ANA pozitív, akkor tesztelni kell a dsDNS, Sm, RNP, Ro / SSA és La / SSB antitesteket is. Ezeknek az antitesteknek a jelenléte nagymértékben növeli annak valószínűségét, hogy a beteg SLE-vel és kapcsolódó rendellenességekkel küzd (lásd 2. táblázat, 17. o.), És a beteget szorosabban kell követni. Az anti-centromer és anti-Scl-70 antitestek kimutatása nagyon hasznos a szkleroderma diagnózisában. Az Ro / SSA és a La / SSB elleni antitestek kimutatása szintén hasznos a Sjögren-szindróma diagnosztizálásában.

Ezen tesztek közül csak az anti-dsDNS használható az aktivitás monitorozására.

Köszönetnyilvánítás: Adós vagyok az UpToDate in Medicine számos szerzőjének munkájával, akik munkája hasznos keretet biztosított e cikk kidolgozásához, valamint Dr. Robert Shmerling, David Lee és Donald Bloch, akikkel dolgozatokat és fejezeteket írtam ugyanarról a témáról.

Dr. Schur a Harvard Medical School orvosprofesszora, valamint a reumatológia, az immunológia és az allergia osztálya a brighami Brigham és a női kórház orvosi osztályán.

1. Reichlin M. A antinukleáris antitestek. Naprakész. 2008. október.
2. Amerikai Reumatológiai Főiskola ad hoc bizottsága az immunológiai tesztekről. Útmutatások a reumatikus betegségek immunológiai laboratóriumi vizsgálatához: Bevezetés. Arthritis Rheum. 2002; 47: 429-433.
3. Salamon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH és mtsai. Bizonyítékokon alapuló irányelvek az immunológiai tesztek alkalmazásához: Antinukleáris antitest tesztelés. Arthritis Rheum. 2002; 47: 434-444.
4. Sinclair D, Saas M, Williams D, Hart M, Goswami R. Helyettesítheti-e az ELISA az immunfluoreszcenciát az antinukleáris antitestek kimutatásában? – nukleáris antitest szűrő ELISA-k. Clin Lab. 2007; 53: 183-191.
5. Avaniss-Aghajani E, Berzon S, Sarkissian A. A multiplexált gyöngyalapú immunvizsgálatok klinikai értéke nukleáris antigénekkel szembeni autoantitestek kimutatására. Clin Vakcina Immunol. 2007; 14: 505-509.
6. Copple SS, Martins TB, Masterson C, Joly E, Hill HR. Három multiplex immunvizsgálat összehasonlítása az extrahálható nukleáris antitestek antitestjeinek kimutatására klinikailag meghatározott szérumok alkalmazásával. Ann N Y Acad Sci.2007; 1109: 464-472.
7. Caramaschi P, Ruzzenente O, Pieropan S és mtsai. Az ANA-specificitás meghatározása multiplexált fluoreszcens mikroszféra immunvizsgálattal magas ANR-pozitív pozitivitású betegeknél az infliximab-kezelés után magas titereken: Előzetes eredmények. Rheumatol Int. 2007; 27: 649-654.
8. Biagini RE, Parks CG, Smith JP, Sammons DL, Robertson SA. Az AtheNA MultiLyte ANA II vizsgálat elemzési teljesítménye több pozitív ANA-val rendelkező lupusos betegek szérumában. Anal Bioanal Chem. 2007; 388: 613-618.
9. Gonzalez C, Garcia-Berrocal B, Perez M és mtsai. A kötőszöveti betegségek laboratóriumi szűrése új, automatizált ENA szűrővizsgálattal (EliA Symphony) klinikailag meghatározott betegeknél. Clin Chim Acta. 2005; 359: 109-114.
10. Eissfeller P, Sticherling M, Scholz D és mtsai. Különböző vizsgálati rendszerek összehasonlítása egyidejű autoantitest kimutatásra kötőszöveti betegségekben. Ann N Y Acad Sci. 2005; 1050: 327-339.
11. Smith J, Onley D, Garey C és mtsai. ANA-specifitás meghatározása az UltraPlex platform segítségével. Ann N Y Acad Sci. 2005; 1050: 286-294.
12. Martins TB, Burlingame R, von Muhlen CA és mtsai. A multiplexált fluoreszcens mikroszféra immunvizsgálat kiértékelése a nukleáris antigének autoantitestjeinek kimutatására. Clin Diagn Lab Immunol. 2004; 11: 1054-1059.
13. Bernardini S, Infantino M, Bellincampi L és mtsai. Antinukleáris antitestek szűrése: Összehasonlítás nukleáris homogenizátumokon, tisztított vagy rekombináns antigéneken alapuló enzim immunoassay és immunfluoreszcencia assay között. Clin Chem Lab Med. 2004; 42: 1155-1160.
14. Nossent H, Rekvig OP. Antinukleáris antitest-szűrés ebben az új évezredben: Búcsú a mikroszkóptól? Scand J Rheumatol. 2001; 30: 123-126; vita 127-128.
15. Lopez-Hoyos M, Rodriguez-Valverde V, Martinez-Taboada V. Az antinukleáris antitest kötőszöveti betegségének szűrése. Ann N Y Acad Sci. 2007; 1109: 322-329.
16. Ghillani P, Rouquette AM, Desgruelles C és mtsai. A LIAISON ANA screen assay értékelése antinukleáris antitest tesztelésre autoimmun betegségek esetén. Ann N Y Acad Sci. 2007; 1109: 407-413.
17. Bonilla E, Francis L, Allam F és mtsai. Az immunfluoreszcens mikroszkópia felülmúlja a fluoreszcens gyöngyöket az antinukleáris antitest reaktivitás kimutatására szisztémás lupus erythematosusos betegeknél. Clin Immunol. 2007; 124: 18–21.
18. Nifli AP, Notas G, Mamoulaki M és mtsai. Multiplex, gyöngyalapú fluoreszcens teszt és immunfluoreszcens módszerek összehasonlítása az ANA és ANCA autoantitestek kimutatására humán szérumban. J Immunol Methods. 2006; 311: 189-197.
19. Shovman O, Gilburd B, Zandman-Goddard G és mtsai. Multiplexelt AtheNA multi-lyte immunvizsgálat ANA-szűréshez autoimmun betegségek esetén. Autoimmunitás. 2005; 38: 105-109.
20. Ulvestad E. A hibrid ELISA teljesítményjellemzői és klinikai haszna az ANA kimutatásához. Apmis. 2001; 109: 217-222.
21. Olaussen E, Rekvig OP. Antinukleáris antitestek (ANA) szűrővizsgálatai: A központi nukleáris antigének szelektív alkalmazása az ELISA-szűrés racionális alapjaként. J Autoimmun. 1999; 13: 95-102.
22. Homburger HA, Cahen YD, Griffiths J, Jacob GL. Antinukleáris antitestek kimutatása: Az enzim immunvizsgálat és a közvetett immunfluoreszcencia módszerek összehasonlító értékelése. Arch Pathol Lab Med. 1998; 122: 993-999.
23. Gniewek RA, Stites DP, McHugh TM, Hilton JF, Nakagawa M. Antinukleáris antitest vizsgálati módszerek összehasonlítása: Immunofluoreszcencia vizsgálat versus enzim immunvizsgálat. Clin Diagn Lab Immunol. 1997; 4: 185-188.
24. Reichlin M. DNS, SM és RNP elleni antitestek. Naprakész. 2008. október.
25. Hahn BH. Antitestek a DNS ellen. New Engl J Med. 1998; 338: 1359.
26. Kavanaugh AF, Solomon DH, az Amerikai Reumatológiai Főiskola ad hoc bizottsága az immunológiai tesztekről. Útmutatások a reumatikus betegségek immunológiai laboratóriumi vizsgálatához: Anti-DNS antitest tesztek. Arthritis Rheum. 2002; 47: 546-555.
27. Benito-Garcia E, Schur PH, Lahita R. Útmutató a reumatikus betegségek immunológiai laboratóriumi vizsgálatához: Anti-Sm és Anti-RNP antitest tesztek. Arthritis Rheum. 2004; 51: 1030-1044.
28. Reichlin M. Az anti-Ro / SSA és anti-La / SSB antitestek klinikai jelentősége. Naprakész. 2008. október.
29. Reveille JD, Sherrer YRS, Solomon DH, Schur P, Kavanaugh A. Bizonyított alapú irányelvek az immunológiai laboratóriumi vizsgálatok használatához: Anti-Ro (SS-A) és La (SS- B): Az ACR ad hoc bizottságának jelentése az immunológiai vizsgálati irányelvekről. Közzétételre benyújtva.
30. Reichlin M. antiriboszomális P fehérje antitestek. Naprakész. 2008. október.
31. Denton CP. A szkleroderma osztályozása. Naprakész. 2008. október.