4 – MODELLI DI ARTICOLO ORIGINALI, BIOLOGICI
Effetto contraccettivo di Uncaria tomentosa (artiglio di gatto) in ratti con endometriosi sperimentale1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose sperimentale
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
IFellow PhD, Università Federale di San Paolo (UNIFESP) e Unità di Endometriosi e Laboratorio Chirurgico, HU-UFMA, Maranhao, Brasile. Progettato il protocollo, coinvolto con le procedure tecniche, responsabile della scrittura del manoscritto, responsabile del contenuto intellettuale e scientifico dello studio, supervisionato tutte le fasi dello studio, fornito linee guida per l’intervento chirurgico
II Studente di laurea, Università Federale di Maranhao (UFMA) , Brasile. Coinvolto nelle procedure tecniche, responsabile della preparazione del manoscritto
IIIMD, Dipartimento di Patologia, HU-UFMA, Maranhao, Brasile. Esami macroscopici e istopatologici
IVPhD, Professore affiliato, UNIFESP, San Paolo e Capo dell’Unità di dolore pelvico ed endometriosi della Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brasile. Responsabile dell’acquisizione e dell’interpretazione dei dati, aiutato con procedure tecniche, fornisce linee guida per gli interventi chirurgici
Corrispondenza
SOMMARIO
SCOPO: valutare i cambiamenti istologici nel parenchima Strato epiteliale dell’utero e dell’ovaio di ratti con endometriosi indotta, trattati con estratto di Uncaria tomentosa.
METODI: 29 ratti con endometriosi sperimentale, sono stati selezionati e divisi in tre gruppi: il gruppo uncaria ha ricevuto 32 mg / ml di estratto di Uncaria tomentosa, 1 ml somministrato al giorno e il gruppo placebo ha ricevuto 1 ml di soluzione salina 0,9% al giorno, per 14 giorni (entrambi i gruppi); il gruppo leuprolide ha ricevuto leuprolide acetato 1 mg / kg di peso corporeo applicato una singola dose sottocutanea. Nel 15 ° giorno di trattamento il corno uterino e le ovaie sono stati rimossi per l’analisi istopatologica.
RISULTATI: Il gruppo uncaria ha presentato nove campioni (90%) con follicoli ovarici immaturi, mentre il gruppo placebo non ha presentato alcun caso e nel gruppo leuprolide c’erano otto ratti (88%) con la stessa variazione. Il gruppo placebo ha mostrato un corpo luteo maturo in tutti gli animali, con una frequenza minore nei gruppi uncaria (10%) e leuprolide (22%). L’epitelio uterino ha mostrato una debole proliferazione in nove (90%) campioni del gruppo uncaria, in due (20%) animali nel gruppo placebo e sette (77,8%) ratti nel gruppo leuprolide.
CONCLUSIONI: I risultati suggeriscono che Uncaria tomentosa ha un effetto contraccettivo.
Parole chiave: Endometriosi. Fitoterapia. Contraccezione. Ratti.
RIPRESA
OBIETTIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experiment e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo recebeu 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 giorni; o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado via sottocutânea dose única. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RISULTATI: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturità incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo no apresentou nenhum case e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) case do grupo placebo e sete (77.8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Introduzione
L’endometriosi è una malattia caratterizzata dalla presenza di tessuto strutturalmente e funzionalmente simile al tessuto endometriale esterno alla cavità uterina, che influisce sulla qualità della vita e riproduttiva capacità dei pazienti. Di solito si sviluppa negli organi pelvici come il peritoneo, le ovaie, le tube di Falloppio, l’utero e il fornice Douglas1,2.
L’incidenza dell’endometriosi raggiunge il 10% circa delle donne in età riproduttiva. Questa patologia si comporta come una malattia responsiva agli estrogeni con attività infiammatorie e immunomodulatorie, nonché squilibrio dell’apoptosi cellulare e stress ossidativo2-5.
Il trattamento dell’endometriosi può essere chirurgico o clinico, la cui terapia farmacologica abituale è quella che interferisce sul normale ciclo mestruale inducendo pseudopregnanza, pseudomenopausa o anovulazione cronica, fornendo un miglioramento clinico. Tuttavia i suoi effetti non sono curativi, con frequenti recidive, che giustificano la ricerca di nuovi trattamenti6.
L’Uncaria tomentosa, popolarmente conosciuta come artiglio di gatto, appartiene alla famiglia delle Rubiacee, comunemente presente nelle zone tropicali di Sud e Centro America. Questa pianta, sotto forma di estratto, è ampiamente utilizzata dalle popolazioni indigene ed è spesso utilizzata come trattamento alternativo per varie malattie. Studi hanno dimostrato che l’artiglio del gatto ha proprietà antinfiammatorie, immunomodulatrici, pro-apoptotiche e antiossidante, nonché effetto contraccettivo, per giustificare una possibile alternativa per il trattamento dell’endometriosi7,8.
Lo scopo di questo studio era di valutare i cambiamenti istologici nello strato epiteliale del parenchima dell’utero e ovarica di ratti con endometriosi indotta, trattata con estratto acquoso di Uncaria tomentosa (artiglio di gatto).
Metodi
Questo studio sperimentale è stato completato tra aprile e maggio 2011, con un campione di 40 ratti Wistar (Rattus norvegicus albinos) adulti, femmine, vergine, di peso compreso tra 180 e 250 grammi, con 60 giorni di età, fornito dal Bioterium dell’Università Federale del Maranhão (UFMA).
Questa ricerca è stata eseguita presso il Laboratorio di Chirurgia Sperimentale dell’Ospedale Universitario del Università Federale del Maranhão. Ha seguito la legislazione brasiliana per l’uso di animali da esperimento (legge Arouca n. 11.794 / 2008) e gli standard stabiliti dal Brazilian College of Animal Experimentation (COBEA), un’istituzione affiliata al Consiglio internazionale per la scienza degli animali da laboratorio. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico per la Sperimentazione Animale (CEEA-UEMA) con il numero di protocollo 011/2011.
Gli animali sono stati raggruppati cinque per gabbia in polipropilene con griglia in acciaio inossidabile, misura 46 cm x 31 cm x 16 cm con il fondo ricoperto di trucioli di legno, cambiato ogni 48 ore. Gli animali sono stati tenuti in condizioni ambientali costanti, ricevendo cibo per ratti (Purina®, San Paolo, Brasile) e acqua ad libitum sette giorni per l’adattamento, con controllo del rumore, temperatura 22 ° C ± 2 ° C, umidità relativa 40% 60%, 12/12 ore di ciclo luce / buio.
L’induzione dell’endometriosi è stata eseguita secondo la metodologia proposta da Nogueira Neto et al.9. Dopo 21 giorni dal primo intervento chirurgico, i ratti sono stati nuovamente sottoposti a un ulteriore intervento chirurgico, momento in cui è stato effettuato l’inventario della cavità peritoneale con identificazione e misurazione del focus dell’autotrapianto con un pachimetro digitale, seguito dal calcolo del volume utilizzando il Sistema di Classificazione dei Gradi di Impianti di crescita secondo Quereda et al.10. Solo quelli che hanno sviluppato il livello di crescita due e tre sono rimasti nello studio.
I ratti sono stati divisi casualmente in tre gruppi. Ogni animale è stato contrassegnato sulla coda con una spazzola permanente da quattro mm (Pilot®, San Paolo, Brasile) e le gabbie sono state identificate. L’inizio della sonda gastrica era dal 22 ° giorno post-chirurgico di induzione dell’endometriosi.
I gruppi sono stati suddivisi come segue: il gruppo Uncaria ha ricevuto sonda gastrica con 32 mg / ml di estratto di Uncaria tomentosa (artiglio di gatto 100 mg, erbario di Brasile), somministrato 1 ml al giorno, e il gruppo placebo ha ricevuto una sonda gastrica giornaliera con 1 ml di soluzione salina allo 0,9%, entrambi per 14 giorni secondo Nogueira Neto et al.9. Il gruppo leuprolide ha ricevuto leuprolide acetato 1 mg / kg di peso corporeo (Lupron TM 3, 75 mg, ABBOTT del Brasile) singola dose sottocutanea11.
Il farmaco sperimentale è composto da 16 g di estratto di artiglio di gatto (Uncaria tomentosa) e 500 ml di soluzione salina allo 0,9%. La lavorazione è stata eseguita macinando 160 compresse da 100 mg di estratto di artiglio di gatto (Artiglio di gatto 100 mg, Erbario del Brasile) in un mortaio di porcellana con un pestello, e quindi procedendo alla dissoluzione dello stesso in 500 ml di NaCl 0,9% in un becher per mescolare fino a che liscio. La miscela è stata preparata in un tempo medio di 15 minuti e il volume totale era di 500 ml in sospensione con una concentrazione di 32 mg / ml9.
Dopo la fine del trattamento, è stato eseguito un nuovo intervento chirurgico e, a questo punto , è stato effettuato nuovamente l’inventario della cavità peritoneale. Il corno uterino destro rimanente ed entrambe le ovaie sono state rimosse per la valutazione istologica. Le parti rimosse sono state pulite con soluzione salina allo 0,9% e conservate in un contenitore con formalina tamponata al 10%, ricevendo l’identificazione e inoltrate al Dipartimento di Patologia dell’Ospedale Universitario dell’Università Federale di Maranhão. Le sezioni di tessuto sono state realizzate e colorate con ematossilina-eosina (HE).
Gli animali di ciascun gruppo sono stati uccisi il quindicesimo giorno dopo l’inizio del trattamento. Dopo il peso, sono stati somministrati 150 mg / kg di tiopentale sodico (Thiopental®, Crystal, St. Paul) tramite somministrazione intraperitoneale.Il farmaco è stato diluito in uguale volume di soluzione salina, secondo la delibera numero 714 del 20 giugno 2002 del Consiglio federale di medicina veterinaria (CFMV). La morte era caratterizzata da arresto cardiorespiratorio e completa assenza di riflessi.
L’analisi dei dati era descrittiva, sulla base dei risultati istologici secondo Mukherji e Bhowmik12.
Risultati
Dal campione iniziale di 40 ratti, dieci sono stati esclusi per non aver sviluppato endometriosi di grado due e tre, e uno per aspirazione durante il gavage. Il campione finale era composto da 29 ratti, suddivisi in tre gruppi: uncaria e placebo, entrambi con dieci animali; e il gruppo leuprolide con nove ratti.
Il gruppo sottoposto a trattamento con Uncaria tomentosa (gruppo Uncaria) ha rivelato follicoli immaturi (Tabella 1 e Figura 1) in nove casi (90%), e follicoli con piena maturazione e maturità corpo luteo (Tabella 2) è presente in un caso (10%).
L’istologia uterina (Tabella 3) ha mostrato endometrio debolmente proliferativo (Figura 2) in nove campioni (90 %).
Il placebo gruppo aveva follicoli con piena maturazione e corpo luteo maturo in tutti i casi (100%). In relazione all’endometrio, era proliferativo in otto casi (80%).
Il gruppo leuprolidi aveva follicoli immaturi in tutti i campioni e corpo luteo atrofizzato in otto campioni (88%). L’endometrio era atrofizzato (Figura 3) in due casi (22,2%) e debolmente proliferativo in sette casi (77,8%).
Discussione
Studi con dati clinici e sperimentali sull’uso di erbe medicinali per il trattamento dell’endometriosi, hanno riportato che diversi farmaci con proprietà antinfiammatorie, analgesiche, immunomodulanti e antiossidanti sono efficaci nel combattere questa malattia. Nuovi studi clinici sull’efficacia delle erbe sono necessari per il trattamento dell’endometriosi nelle donne13. In questo senso, la guida alle prove per la diagnosi e il trattamento dell’endometriosi condotta dalla Società europea di riproduzione umana ed embriologia, considera un grado di raccomandazione di grado D per l’uso di erbe medicinali nel trattamento dell’endometriosi, cioè non ci sono prove a sostegno di questi trattamenti, ma questa società raccomanda di non scartare i farmaci a base di erbe perché in alcune donne che hanno utilizzato queste erbe si è notato una diminuzione del dolore e una migliore qualità della vita. Inoltre, abbiamo il fatto che l’artiglio del gatto ne ha già autorizzato l’uso da parte di istituzioni come la FDA (Food and Drug Administration) come integratore alimentare.
La conoscenza dell’endometriosi sulla fisiopatologia con alterazioni infiammatorie, apoptotiche , immunomodulatori e antiossidanti, hanno fornito le basi per l’uso sperimentale di farmaci che possiedono meccanismi d’azione con gli effetti negativi di questi cambiamenti sopra menzionati. Uno studio sperimentale che utilizza questo estratto ha mostrato una significativa riduzione del focus endometriale9.
L’artiglio del gatto riduce sperimentalmente l’endometriosi, è necessario valutare il meccanismo d’azione dell’Uncaria tomentosa per il trattamento di questa patologia. Tra i farmaci comunemente usati per trattare l’endometriosi ci sono i contraccettivi, con azione nota contro l’endometriosi. Nella valutazione in vitro della coltura del tessuto tumorale mammario (carcinoma duttale infiltrante, stadio II e scarsamente differenziato) è stata utilizzata Uncaria tomentosa e confrontata con metotrexato, dove è stata osservata una diminuzione in area specifica dei recettori degli estrogeni provocata da questa erboristeria, che attribuisce un’azione contraccettiva nei confronti di Uncaria tomentosa 15. Sulla base di questa premessa si è reso necessario valutare l’effetto contraccettivo dell’artiglio del gatto.
Il parametro istologico scelto per valutare gli effetti contraccettivi è stato realizzato sulla base di uno studio che ha esaminato l’uso del medrossi-progesterone intramuscolare nei ratti con dosi diverse, seguita dall’analisi istologica delle ovaie e dello strato epiteliale dell’utero del campione12. Sono stati organizzati in tre gruppi, controlli sperimentali, positivi e negativi. Il gruppo sperimentale (gruppo Uncaria) ha fatto uso 32 mg / die di estratto di Uncaria tomentosa e il gruppo di controllo negativo (gruppo Placebo) utilizzato giornalmente 1 ml di soluzione salina 0,9% a base di Neto e t al.9, che ha mostrato una significativa riduzione dell’endometriosi senza complicazioni cliniche evidenti. Il gruppo di controllo positivo (gruppo leuprolide) ha ricevuto leuprolide acetato 1 mg / kg di peso corporeo applicata singola dose sottocutanea, sulla base di Oktem et al.11, che ha valutato l’uso di alte dosi di atorvastatina su endometriosi sperimentale con risultati soddisfacenti11. Il leuprolide acetato è un analogo del GnRH, che ha ottimi risultati nelle donne con endometriosi, ma ha un uso limitato a causa degli effetti collaterali, caratterizzati principalmente da perdita ossea e disturbi del climaterio14.
L’analisi istologica delle ovaie ha mostrato cambiamenti simili nei gruppi uncaria e leuprolidi, mostrando un’assenza di atrofia del corpo luteo e dei follicoli ovarici primari, nella maggior parte dei campioni, il che suggerisce l’assenza di attività ovarica. Nella valutazione istologica dello strato epiteliale uterino, i gruppi Uncaria e leuprolide si sono comportati ancora in modo simile, con i loro campioni hanno mostrato strati epiteliali debolmente proliferativi, contrariamente a quanto osservato nel gruppo placebo con tutti i loro campioni in fase proliferativa. Questi dati secondo Mukherji e Bhowmik12 sono compatibili con la contraccezione.
Conclusione
Considerando i risultati istopatologici in ratti con endometriosi sperimentale esposti all’estratto di Uncaria tomentosa e confrontati con controllo positivo e negativo gruppi, suggeriamo che le modifiche riscontrate siano compatibili con la contraccezione.
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Conflitto di interessi: nessuno
Fonte finanziaria: nessuno