Introduzione
La trasformazione è il processo di introduzione di DNA estraneo (es. plasmidi, BAC) in un batterio. Le cellule batteriche in cui può essere trasformato il DNA estraneo sono chiamate competenti. Alcuni batteri sono naturalmente competenti (ad esempio B. subtilis), mentre altri come E. coli non sono naturalmente competenti. Le cellule non competenti possono essere rese competenti e quindi trasformate tramite uno dei due approcci principali; trasformazione chimica ed elettroporazione.
Entrambi i metodi di trasformazione presentano vantaggi e svantaggi. In generale, la trasformazione chimica è meno soggetta a errori e più veloce, tuttavia l’elettroporazione produce una maggiore efficienza di trasformazione (frazione di cellule trasformate che effettivamente assorbono il DNA estraneo). Vedere Clonazione per una discussione più completa di entrambi gli approcci.
Protocolli
OpenWetWare ha già una serie di protocolli relativi alla trasformazione batterica, ma altri sono sempre i benvenuti.
Se se usi una variante su uno di questi protocolli, sentiti libero di aggiungere un link al tuo protocollo da una di queste pagine in modo che altri utenti possano trovare un protocollo che funzioni per loro. Inoltre, se qualcuno utilizza i protocolli ad alta efficienza Innoe o Hanahan, aggiungi i protocolli qui.
Trasformazione chimica
Se prevedi di eseguire una trasformazione chimica, dovresti vederli pagine –
- Preparazione di cellule chimicamente competenti
- Preparazione di tampone TSS
- Trasformazione di cellule chimicamente competenti
- Preparazione di cellule chimicamente competenti (Inoue )
- Trasformazione di cellule chimicamente competenti (Inoue)
- TOP10 cellule chimicamente competenti
Confronto del tampone di trasformazione chimica
Qualcuno dovrebbe controlla le affermazioni di Nishimura90. tk 08:58, 25 settembre 2007 (EDT)
Protocollo di trasformazione del cloruro di rubidio qui
Qualcuno dovrebbe verificare le affermazioni della competenza chimica 1e10 utilizzando i protocolli di etanolo al 10% e cloruro di calcio qui.
Elettroporazione
Se prevedi di utilizzare l’elettroporazione, consulta queste pagine:
- Celle elettrocompetenti
- Elettroporazione
Tutti gli abstract di Medline: PubMed | HubMed