4 – ORIGINELE ARTIKELMODELLEN, BIOLOGISCH
Anticonceptie-effect van Uncaria tomentosa (kattenklauw) bij ratten met experimentele endometriose1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) en ratas com endometriose experimenteel
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva Cavalcante II; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura Rodrigues II; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
I Fellow PhD-graad, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP) en Unit of Endometriosis and Surgical Laboratory, HU-UFMA, Maranhao, Brazilië. Het protocol ontworpen, betrokken bij technische procedures, verantwoordelijk voor het schrijven van manuscripten, verantwoordelijk voor de intellectuele en wetenschappelijke inhoud van de studie, toezicht gehouden op alle fasen van de studie, richtlijnen voor de chirurgische ingreep verstrekt
II Afgestudeerde student, Federale Universiteit van Maranhao (UFMA) , Brazilië. Betrokken bij technische procedures, verantwoordelijk voor manuscriptvoorbereiding
IIIMD, Afdeling Pathologie, HU-UFMA, Maranhao, Brazilië. Macroscopisch en histopathologisch onderzoek
IVPhD, aangesloten professor, UNIFESP, Sao Paulo en hoofd van de eenheid bekkenpijn en endometriose van de Paulista School of Medicine (EPM-UNIFESP), Brazilië. Verantwoordelijk voor het verzamelen en interpreteren van gegevens, geholpen met technische procedures, richtlijnen geven voor de chirurgische ingrepen
Correspondentie
SAMENVATTING
DOEL: Evalueer de histologische veranderingen in parenchym ´s epitheellaag van de baarmoeder en de eierstok van ratten met geïnduceerde endometriose, behandeld met Uncaria tomentosa-extract.
METHODEN: 29 ratten met experimentele endometriose werden geselecteerd en verdeeld in drie groepen: de uncaria-groep ontving 32 mg / ml Uncaria tomentosa-extract, 1 ml dagelijks toegediend en de placebogroep kreeg 1 ml zoutoplossing 0,9% per dag, gedurende 14 dagen (beide groepen); de leuprolide-groep ontving een enkelvoudige subcutane dosis leuprolide-acetaat 1 mg / kg lichaamsgewicht. Op de 15e dag van de behandeling werden de baarmoederhoorn en eierstokken verwijderd voor histopathologische analyse.
RESULTATEN: De uncaria-groep presenteerde negen monsters (90%) met onvolgroeide ovariële follikels, terwijl de placebogroep geen enkel geval vertoonde en in de leuprolide-groep waren er acht ratten (88%) met dezelfde verandering. De placebogroep vertoonde volwassen corpus luteum bij alle dieren en kwam minder vaak voor in de uncaria- (10%) en leuprolide- (22%) groepen. Het baarmoederepitheel vertoonde een zwakke proliferatie in negen (90%) monsters van de uncaria-groep, bij twee (20%) dieren in de placebogroep en zeven (77,8%) ratten in de leuprolide-groep.
CONCLUSIES: De bevindingen suggereren dat Uncaria tomentosa een contraceptieve werking heeft.
Sleutelwoorden: Endometriose. Fytotherapie. Anticonceptie. Ratten.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima de ratas with endometriose induzida tratadas with extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimentele en formados três grupos: O grupo uncaria recept extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml oa dia eo grupo placebo recept 1ml solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida ontvangen acetato de leuprolida 1 mg / kg de peso corporale aplicado via subcutane dosis única. Geen 15 ° dia van het realizeren van de draad van de baarmoeder en een ovarium voor een ana- lise histopatológica.
RESULTATEN: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) met een ander mesma. O grupo placebobehandeling van corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) en leuprolida (22%). Het beste van het grootste deel van de groei in de omgeving (90%) van de gruwelijke unacaria, 20% met de grupo placebo en de sete (77,8%) zonder grupo leuprolida.
CONCLUSIE: Os achados sugerem que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Inleiding
Endometriose is een ziekte die wordt gekenmerkt door de aanwezigheid van weefsel dat structureel en functioneel vergelijkbaar is met het endometriumweefsel buiten de baarmoederholte, wat de kwaliteit van leven en reproductieve capaciteit van patiënten. Ontwikkelt zich meestal in de bekkenorganen zoals het peritoneum, de eierstokken, de eileiders, de baarmoeder en fornix Douglas1,2.
De incidentie van endometriose is zo hoog als ongeveer 10% van de vrouwen in de vruchtbare leeftijd. Deze pathologie gedraagt zich als een op oestrogeen reagerende ziekte met inflammatoire en immunomodulerende activiteiten, evenals onbalans van cellulaire apoptose en oxidatieve stress2-5.
De behandeling van endometriose kan chirurgisch of klinisch zijn. De gebruikelijke medicamenteuze therapie is er een die de normale menstruatiecyclus verstoort en pseudozwangerschap, pseudomenopauze of chronische anovulatie induceert, wat klinische verbetering oplevert. De effecten zijn echter niet genezend, met frequente recidieven, die de zoektocht naar nieuwe behandelingen rechtvaardigen6.
De Uncaria tomentosa, in de volksmond bekend als kattenklauw, behoort tot de Rubiaceae-familie, die veel voorkomt in tropische gebieden van Zuid- en Midden-Amerika. Deze plant, in de vorm van extract, wordt veel gebruikt door inheemse mensen en wordt vaak gebruikt als een alternatieve behandeling voor verschillende ziekten. Studies hebben aangetoond dat kattenklauw ontstekingsremmende, immunomodulerende, pro-apoptotische en anti-oxidant, evenals anticonceptie-effect, om een mogelijk alternatief voor de behandeling van endometriose te rechtvaardigen7,8.
Het doel van deze studie was om de histologische veranderingen in de parenchymepitheellaag van de baarmoeder en ovarium van ratten met geïnduceerde endometriose, behandeld met Uncaria tomentosa waterig extract (kattenklauw).
Methoden
Deze experimentele studie werd voltooid tussen april en mei 2011, met een steekproef van 40 Wistar-ratten (Rattus norvegicus albinos) volwassen, vrouwtjes, maagd, met een gewicht tussen 180 en 250 gram, met een leeftijd van 60 dagen, verstrekt door het Bioterium van de Federale Universiteit van Maranhão (UFMA).
Dit onderzoek werd uitgevoerd in het laboratorium voor experimentele chirurgie van het Universitair Ziekenhuis van de Federale Universiteit van Maranhão. Het volgde de Braziliaanse wetgeving voor het gebruik van proefdieren (Arouca-wet nr. 11.794 / 2008) en de normen van het Brazilian College of Animal Experimentation (COBEA), een instelling die is aangesloten bij de International Council for Laboratory Animal Science. De studie werd goedgekeurd door de Animal Experimentation Ethics Committee (CEEA-UEMA) onder protocolnummer 011/2011.
De dieren werden gegroepeerd vijf per polypropyleen kooi met roestvrijstalen grillafdekking van 46 cm x 31 cm x 16 cm met de bodem bedekt met houtkrullen, elke 48 uur vervangen. De dieren werden onder constante omgevingsomstandigheden gehouden, kregen rattenvoer (Purina®, São Paulo, Brazilië) en zeven dagen lang ad libitum water voor aanpassing, met geluidsbeheersing, temperatuur 22 ° C ± 2 ° C, relatieve vochtigheid 40% 60%, 12/12 uur licht / donker cyclus.
De inductie van endometriose werd uitgevoerd volgens de methodologie voorgesteld door Nogueira Neto et al.9. Na 21 dagen na de eerste operatie ondergingen de ratten opnieuw een verdere operatie, waarbij de inventaris van de peritoneale holte werd gemaakt met identificatie en meting van de autotransplantatiefocus met een digitale pachymeter, gevolgd door het berekenen van het volume met behulp van het gradenclassificatiesysteem van Groei-implantaten in overeenstemming met Quereda et al.10. Alleen de ratten die groeiniveau twee en drie hadden ontwikkeld, bleven in het onderzoek.
De ratten werden willekeurig in drie groepen verdeeld. Elk dier werd op de staart gemerkt met een permanente borstel van vier mm (Pilot®, São Paulo, Brazilië) en de kooien werden geïdentificeerd. Het begin van de sondevoeding was vanaf 22 postoperatieve dagen van endometriose-inductie.
De groepen werden als volgt verdeeld: groep Uncaria ontving sondevoeding met 32 mg / ml Uncaria tomentosa-extract (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium van Brazilië), 1 ml per dag toegediend, en de placebogroep kreeg dagelijks 1 ml zoutoplossing 0,9%, beide gedurende 14 dagen volgens Nogueira Neto et al.9. De groep leuprolide ontving leuprolide-acetaat 1 mg / kg lichaamsgewicht (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT van Brazilië) enkelvoudige subcutane dosis11.
Het experimentele medicijn bestaat uit 16 g kattenklauwextract (Uncaria tomentosa) en 500 ml 0,9% zoutoplossing. De verwerking werd gedaan door 160 tabletten van 100 mg Cat’s Claw-extract (Cat’s Claw 100 mg, Herbarium of Brazil) in een porseleinen vijzel met een stamper te malen en vervolgens verder op te lossen in 500 ml 0,9% NaCl. in een bekerglas om tot een gladde massa te mengen. Het mengsel werd gemaakt in een gemiddelde tijd van 15 minuten en het totale volume was 500 ml in suspensie met een concentratie van 32 mg / ml9.
Na het einde van de behandeling werd een nieuwe operatie uitgevoerd en op dit moment werd de inventaris van de buikholte opnieuw gemaakt. De overgebleven rechter baarmoederhoorn en beide eierstokken werden verwijderd voor histologische evaluatie. De verwijderde delen werden gereinigd met 0,9% zoutoplossing en opgeslagen in een container met 10% gebufferde formaline, met identificatie en doorgestuurd naar de afdeling Pathologie van het Universitair Ziekenhuis van de Federale Universiteit van Maranhão. Weefselcoupes werden gemaakt en gekleurd met hematoxyline-eosine (HE).
De dieren in elke groep werden op de 15e dag na het begin van de behandeling gedood. Na gewicht hebben ze 150 mg / kg natriumthiopental (Thiopental®, Crystal, St. Paul) gekregen via de intraperitoneale toediening.Het medicijn werd verdund in een gelijk volume zoutoplossing, volgens resolutie nummer 714, 20 juni 2002, Federale Raad voor Diergeneeskunde (CFMV). De dood werd gekenmerkt door hartstilstand en volledige afwezigheid van reflexen.
Gegevensanalyse was beschrijvend, gebaseerd op de histologische bevindingen volgens Mukherji en Bhowmik12.
Resultaten
Van de eerste steekproef van 40 ratten werden tien uitgesloten omdat ze geen endometriose graad twee en drie ontwikkelden, en één vanwege aspiratie tijdens sondevoeding. Het uiteindelijke monster was samengesteld uit 29 ratten, verdeeld in drie groepen: uncaria en placebo, beide met tien dieren; en leuprolide-groep met negen ratten.
De groep die werd behandeld met Uncaria tomentosa (Uncaria-groep) vertoonde in negen gevallen (90%) onvolgroeide follikels (Tabel 1 en Figuur 1) en de follikels waren volledig gerijpt en volgroeid. corpus luteum (tabel 2) is aanwezig in één geval (10%).
De baarmoederhistologie (tabel 3) toonde een zwak proliferatief endometrium (figuur 2) in negen monsters (90 %).
De placebo groep had follikels met volledige rijping en volwassen corpus luteum in alle gevallen (100%). Met betrekking tot het endometrium was het proliferatief in acht gevallen (80%).
De leuprolide-groep had onvolgroeide follikels in alle monsters en atrofisch corpus luteum in acht monsters (88%). Het baarmoederslijmvlies was in twee gevallen (22,2%) geatrofieerd (Figuur 3) en zwak proliferatief in zeven gevallen (77,8%).
Discussie
Studies met klinische en experimentele gegevens over het gebruik van medicinale kruiden om endometriose te behandelen, meldden dat verschillende geneesmiddelen met ontstekingsremmende, pijnstillende, immunomodulerende en antioxiderende eigenschappen effectief zijn bij het bestrijden van deze ziekte. Nieuwe klinische studies over de effectiviteit van kruiden zijn nodig voor de behandeling van endometriose bij vrouwen13. In die zin beschouwt de bewijsgids voor de diagnose en behandeling van endometriose, uitgevoerd door de European Society of Human Reproduction and Embryology, een aanbevelingsgraad van graad D voor het gebruik van medicinale kruiden bij de behandeling van endometriose, dat wil zeggen, er is geen bewijs om deze behandelingen te ondersteunen, maar deze vereniging beveelt aan om kruidengeneesmiddelen niet weg te gooien, omdat bij sommige vrouwen die deze kruiden gebruikten een verminderde pijn en een verbeterde kwaliteit van leven werd opgemerkt. Bovendien hebben we het feit dat kattenklauw het gebruik ervan al heeft goedgekeurd door instellingen zoals de FDA (Food and Drug Administration) als voedingssupplement.
De kennis van endometriose over fysiopathologie met inflammatoire veranderingen, apoptotisch , immunomodulerend en antioxidant, vormden de basis voor het experimenteel gebruik van geneesmiddelen die werkingsmechanismen hebben met nadelige effecten van de bovengenoemde veranderingen. Een experimenteel onderzoek waarbij dit extract werd gebruikt, toonde een significante vermindering van de endometriale focus9 aan.
Eens vastgesteld dat de cat’s claw endometriose experimenteel vermindert, is het noodzakelijk om het Uncaria tomentosa-werkingsmechanisme voor de behandeling van deze pathologie te evalueren. Onder de geneesmiddelen die gewoonlijk worden gebruikt om endometriose te behandelen, zijn de anticonceptiva, waarvan bekend is dat ze werkzaam zijn tegen endometriose. Bij de evaluatie werd in vitro kweek van het borsttumorweefsel (infiltrerend ductaal carcinoom, stadium II en slecht gedifferentieerd) Uncaria tomentosa gebruikt en vergeleken met methotrexaat, waar een afname werd waargenomen in het specifieke gebied van oestrogeenreceptoren veroorzaakt door dit kruidengeneesmiddel, wat een anticonceptieve werking tegen Uncaria tomentosa 15. Op basis van deze premisse is het noodzakelijk geworden om het anticonceptieve effect van kattenklauw te evalueren.
De histologische parameter die is gekozen om de anticonceptie-effecten te evalueren, is gemaakt op basis van een studie waarin het gebruik van intramusculair medroxy-progesteron bij ratten met verschillende doses, gevolgd door histologische analyse van de eierstokken en de baarmoederepitheellaag van het monster12. Ze waren georganiseerd in drie groepen, experimentele, positieve en negatieve controles. De experimentele groep (Uncaria-groep) maakte gebruik van 32 mg / dag Uncaria tomentosa-extract en de negatieve controlegroep (Placebo-groep) gebruikten dagelijks 1 ml zoutoplossing 0,9% op basis van Neto e t al.9, die een significante vermindering van endometriose liet zien zonder duidelijke klinische complicaties. De positieve controlegroep (leuprolide-groep) ontving een enkele subcutane dosis leuprolide-acetaat van 1 mg / kg lichaamsgewicht, gebaseerd op Oktem et al.11, die het gebruik van hoge doses atorvastatine op experimentele endometriose met bevredigende resultaten evalueerde11. Het leuprolide-acetaat is een GnRH-analoog, dat uitstekende resultaten geeft bij vrouwen met endometriose, maar beperkt wordt gebruikt vanwege bijwerkingen, voornamelijk gekenmerkt door botverlies en climacterische klachten14.
Histologische analyse van eierstokken toonde vergelijkbare veranderingen in uncaria- en leuprolide-groepen, waarbij in de meeste monsters geen atrofie van corpus luteum en primaire ovariumfollikels werd aangetoond, wat de afwezigheid van ovariële activiteit suggereert. Bij histologische evaluatie van de uteriene epitheellaag presteerden Uncaria- en leuprolide-groepen opnieuw op dezelfde manier, waarbij hun monsters zwak proliferatieve epitheellagen vertoonden, in tegenstelling tot wat werd waargenomen in de placebogroep met al hun monsters in de proliferatieve fase. Deze gegevens volgens Mukherji en Bhowmik12 zijn compatibel met anticonceptie.
Conclusie
Gezien de histopathologische bevindingen bij ratten met experimentele endometriose blootgesteld aan het extract van Uncaria tomentosa en vergeleken met positieve en negatieve controle groepen, stellen we voor dat de gevonden veranderingen compatibel zijn met anticonceptie.
1. Sampson J. Peritoneale endometriose als gevolg van menstruele verspreiding van endometriumweefsel in de peritoneale holte. Ben J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Inductie van peritoneale endometriose bij naakte muizen met gebruik van menselijke geïmmortaliseerde endometriose-epitheel- en stromacellen: een potentieel experimenteel instrument om de moleculaire pathogenese van endometriose bij de mens te bestuderen. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Verband tussen apoptose en het aantal macrofagen in eutopisch endometrium bij vrouwen met en zonder endometriose. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Behandeling van endometriose. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K.Veranderingen in chromosoomstructuur, mitotische activiteit en nucleair DNA-gehalte van cellen van Allium Test geïnduceerd door schorswatextract van Uncaria tomentosa (Wild ) DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Experimentele endometriose-reductie bij ratten behandeld met Uncaria tomentosa (kattenklauw) Extract. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Individuele en gecombineerde effecten van triptoreline en gestrinon op experimentele endometriose bij ratten. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Histologische veranderingen in de eierstok en baarmoeder van ratten na injecteerbare anticonceptietherapie Anticonceptie. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Uitputting van specifieke bindingsplaatsen voor oestrogeenreceptor door Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Belangenconflict: geen
Financiële bron: geen