Inleiding
Transformatie is het proces waarbij vreemd DNA (bijv. plasmiden, BAC) in een bacterie wordt geïntroduceerd. Bacteriële cellen waarin vreemd DNA kan worden getransformeerd, worden competent genoemd. Sommige bacteriën zijn van nature competent (bijvoorbeeld B. subtilis), terwijl andere, zoals E. coli, niet van nature competent zijn. Niet-competente cellen kunnen competent worden gemaakt en vervolgens worden getransformeerd via een van de twee hoofdbenaderingen; chemische transformatie en elektroporatie.
Er zijn voor- en nadelen aan beide transformatiemethoden. Over het algemeen is chemische transformatie minder foutgevoelig en sneller, maar elektroporatie produceert een hogere transformatie-efficiëntie (fractie van getransformeerde cellen die het vreemde DNA daadwerkelijk opnemen). Zie Klonen voor een uitgebreidere bespreking van beide benaderingen.
Protocollen
OpenWetWare heeft al een aantal protocollen met betrekking tot bacteriële transformatie, maar meer zijn altijd welkom.
Als u een variant op een van deze protocollen gebruikt, kunt u vanaf een van deze pagina’s een link naar uw protocol toevoegen zodat andere gebruikers een protocol kunnen vinden dat voor hen werkt. Bovendien, als iemand de Innoe- of Hanahan-protocollen met hoge efficiëntie gebruikt, voeg dan hier protocollen toe.
Chemische transformatie
Als u van plan bent een chemische transformatie uit te voeren, dan zou u deze moeten zien pagina’s –
- Chemisch competente cellen voorbereiden
- TSS-buffer voorbereiden
- Chemisch competente cellen transformeren
- Chemisch competente cellen voorbereiden (Inoue )
- Chemisch competente cellen transformeren (Inoue)
- TOP10 chemisch competente cellen
Chemisch-transformatiebuffer vergelijking
Iemand zou bekijk de claims van Nishimura90. tk 08:58, 25 september 2007 (EDT)
Rubidiumchloride-transformatieprotocol hier
Iemand zou de claims van 1e10 chemische competentie moeten controleren met behulp van 10% ethanol- en calciumchloride-protocollen hier.
Elektroporatie
Als u van plan bent elektroporatie te gebruiken, raadpleeg dan deze pagina’s –
- Elektrocompetente cellen
- Elektroporatie
Alle samenvattingen van Medline: PubMed | HubMed