4 – MODÈLES D’ARTICLE ORIGINAL, BIOLOGIQUE
Effet contraceptif de Uncaria tomentosa (griffe de chat) chez le rat avec endométriose expérimentale1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas avec endométriose expérimentale
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
Diplôme de doctorat, Université fédérale de Sao Paulo (UNIFESP) et unité de laboratoire d’endométriose et de chirurgie, HU-UFMA, Maranhao, Brésil. Conçu le protocole, impliqué dans les procédures techniques, responsable de la rédaction du manuscrit, responsable du contenu intellectuel et scientifique de l’étude, supervisé toutes les phases de l’étude, fourni des lignes directrices pour l’intervention chirurgicale
II Étudiant diplômé, Université fédérale de Maranhao (UFMA) , Brésil. Impliqué dans les procédures techniques, responsable de la préparation des manuscrits
IIIMD, Département de pathologie, HU-UFMA, Maranhao, Brésil. Examens macroscopiques et histopathologiques
IVPhD, professeur affilié, UNIFESP, Sao Paulo et chef d’unité de douleur pelvienne et endométriose de l’École de médecine Paulista (EPM-UNIFESP), Brésil. Responsable de l’acquisition et de l’interprétation des données, aidé avec les procédures techniques, fournir des directives pour les interventions chirurgicales
Correspondance
RÉSUMÉ
OBJECTIF: Évaluer les changements histologiques dans le parenchyme ´s couche épithéliale de l’utérus et de l’ovaire de rats atteints d’endométriose induite, traités avec un extrait d’Uncaria tomentosa.
MÉTHODES: 29 rats atteints d’endométriose expérimentale, ont été sélectionnés et divisés en trois groupes: Le groupe uncaria a reçu 32 mg / ml d’extrait d’Uncaria tomentosa, 1 ml administré quotidiennement et le groupe placebo a reçu 1 ml de solution saline à 0,9% par jour, pendant 14 jours (les deux groupes); le groupe leuprolide a reçu de l’acétate de leuprolide 1 mg / kg de poids corporel en dose unique sous-cutanée. Au 15ème jour de traitement, la corne utérine et les ovaires ont été prélevés pour analyse histopathologique.
RESULTATS: Le groupe uncaria a présenté neuf échantillons (90%) avec des follicules ovariens immatures, alors que le groupe placebo n’a présenté aucun cas et dans le groupe leuprolide il y avait huit rats (88%) avec le même changement. Le groupe placebo a montré un corps jaune mature chez tous les animaux, survenant moins fréquemment dans les groupes uncaria (10%) et leuprolide (22%). L’épithélium utérin a montré une faible prolifération dans neuf (90%) échantillons du groupe uncaria, chez deux (20%) animaux du groupe placebo et sept (77,8%) rats dans le groupe leuprolide.
CONCLUSIONS: Les résultats suggèrent qu’Uncaria tomentosa a un effet contraceptif.
Mots clés: Endométriose. Phytothérapie. La contraception. Rats.
RESUMO
OBJET: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionadas 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria recebeu extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia eo grupo placebo receiver 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o Grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado via subcutânea dose única. No 15 ° dia de tratamento realizou-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RÉSULTATS: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolida houve oito ratas (88%) com a mesma alteração. O groupe placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, acontecendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostrou fracamente proliferativo em nove (90%) das amostras do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSION: Os achados sugerem que un Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Introduction
L’endométriose est une maladie caractérisée par la présence de tissu structurellement et fonctionnellement similaire au tissu endométrial à l’extérieur de la cavité utérine, ce qui affecte la qualité de vie et la reproduction capacité des patients. Se développe généralement dans les organes pelviens tels que le péritoine, les ovaires, les trompes de Fallope, l’utérus et le fornix Douglas1,2.
L’incidence de l’endométriose est aussi élevée qu’environ 10% des femmes en âge de procréer. Cette pathologie se comporte comme une maladie sensible aux œstrogènes avec des activités inflammatoires et immunomodulatrices, ainsi qu’un déséquilibre de l’apoptose cellulaire et du stress oxydatif2-5.
Le traitement de l’endométriose peut être chirurgical ou clinique, dont le traitement médicamenteux habituel est celui qui interfère sur le cycle menstruel normal induisant une pseudo-grossesse, une pseudoménopause ou une anovulation chronique, apportant une amélioration clinique. Cependant ses effets ne sont pas curatifs, avec des récidives fréquentes, ce qui justifie la recherche de nouveaux traitements6.
L’Uncaria tomentosa, populairement connue sous le nom de griffe de chat, appartient à la famille des Rubiaceae, que l’on trouve couramment dans les zones tropicales de Amérique du Sud et Amérique centrale. Cette plante, sous forme d’extrait, est largement utilisée par les peuples autochtones et est souvent utilisée comme traitement alternatif pour diverses maladies. Des études ont montré que la griffe de chat a des propriétés anti-inflammatoires, immunomodulatrices et pro-apoptotiques. et anti-oxydant, ainsi que l’effet contraceptif, pour justifier une alternative possible au traitement de l’endométriose7,8.
Le but de cette étude était d’évaluer les changements histologiques de la couche épithéliale du parenchyme de l’utérus et ovaire de rats atteints d’endométriose induite, traités avec un extrait aqueux d’Uncaria tomentosa (griffe de chat).
Méthodes
Cette étude expérimentale a été réalisée entre avril et mai 2011, avec un échantillon de 40 rats Wistar (Rattus norvegicus albinos) adultes, femelles, vierge, pesant entre 180 et 250 grammes, avec 60 jours d’âge, fournie par le Bioterium de l’Université fédérale de Maranhão (UFMA).
Cette recherche a été réalisée au laboratoire de chirurgie expérimentale de l’hôpital universitaire de la Université fédérale de Maranhão. Il respectait la législation brésilienne sur l’utilisation des animaux de laboratoire (loi Arouca n ° 11 794/2008) et les normes établies par le Collège brésilien d’expérimentation animale (COBEA), une institution affiliée au Conseil international des sciences animales de laboratoire. L’étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’expérimentation animale (CEEA-UEMA) sous le numéro de protocole 011/2011.
Les animaux ont été regroupés cinq par cage en polypropylène avec grille en acier inoxydable, mesurant 46 cm x 31 cm x 16 cm avec le fond recouvert de copeaux de bois, changé toutes les 48 heures. Les animaux ont été maintenus dans des conditions environnementales constantes, recevant de la nourriture pour rats (Purina®, São Paulo, Brésil) et de l’eau à volonté pendant sept jours pour adaptation, avec contrôle du bruit, température 22 ° C ± 2 ° C, humidité relative 40% 60%, 12/12 heures de cycle lumière / obscurité.
L’induction de l’endométriose a été réalisée selon la méthodologie proposée par Nogueira Neto et al.9. Après 21 jours depuis la première intervention chirurgicale, les rats ont subi une nouvelle intervention chirurgicale, moment auquel a été fait l’inventaire de la cavité péritonéale avec identification et mesure du foyer d’autotransplantation avec un pachymètre numérique, puis calcul du volume à l’aide du système de classification des degrés de Implants de croissance selon Quereda et al.10. Seuls ceux qui ont développé un niveau de croissance deux et trois sont restés dans l’étude.
Les rats ont été répartis au hasard en trois groupes. Chaque animal a été marqué sur la queue avec une brosse permanente de 4 mm (Pilot®, São Paulo, Brésil) et les cages ont été identifiées. Le début du gavage était de 22 jours post-chirurgicaux d’induction de l’endométriose.
Les groupes ont été divisés comme suit: le groupe Uncaria a reçu un gavage avec 32 mg / ml d’extrait d’Uncaria tomentosa (Cat « s Claw 100 mg, Herbier de Brésil), administré 1 ml par jour, et le groupe placebo a reçu un gavage quotidien avec 1 ml de solution saline à 0,9%, tous deux pendant 14 jours selon Nogueira Neto et al.9. Le groupe leuprolide a reçu 1 mg d’acétate de leuprolide / kg de poids corporel (LupronTM 3, 75 mg, ABBOTT du Brésil) dose unique sous-cutanée11.
Le médicament expérimental est composé de 16 g d’extrait de griffe de chat (Uncaria tomentosa) et de 500 ml de solution saline à 0,9%. Le traitement a été effectué en broyant 160 comprimés de 100 mg d’extrait de griffe de chat (Cat « s Claw 100 mg, Herbier du Brésil) dans un mortier en porcelaine avec un pilon, puis en procédant à la dissolution de celui-ci dans 500 ml de NaCl à 0,9% dans un bécher pour mélanger jusqu’à consistance lisse. Le mélange a été réalisé en un temps moyen de 15 minutes, et le volume total était de 500 ml en suspension avec une concentration de 32 mg / ml9.
Après la fin du traitement, une nouvelle chirurgie a été pratiquée et, à ce moment , l’inventaire de la cavité péritonéale a été refait. La corne utérine droite restante et les deux ovaires ont été prélevés pour une évaluation histologique. Les pièces retirées ont été nettoyées avec une solution saline à 0,9% et stockées dans un récipient contenant du formol tamponné à 10%, recevant une identification et envoyées au département de pathologie de l’hôpital universitaire de l’Université fédérale de Maranhão. Des coupes de tissu ont été réalisées et colorées avec de l’hématoxyline-éosine (HE).
Les animaux de chaque groupe ont été tués le 15e jour après le début du traitement. Après leur poids, ils ont reçu 150 mg / kg de thiopental sodique (Thiopental®, Crystal, St. Paul) par voie intrapéritonéale.Le médicament a été dilué dans un volume égal de solution saline, conformément à la résolution numéro 714 du 20 juin 2002 du Conseil fédéral de médecine vétérinaire (CFMV). La mort était caractérisée par un arrêt cardio-respiratoire et une absence totale de réflexes.
L’analyse des données était descriptive, basée sur les résultats histologiques selon Mukherji et Bhowmik12.
Résultats
De l’échantillon initial de 40 rats, dix ont été exclus pour ne pas développer une endométriose de grades deux et trois, et un en raison d’une aspiration pendant le gavage. L’échantillon final a été composé pour 29 rats, étant divisé en trois groupes: uncaria et placebo, tous deux avec dix animaux; et le groupe leuprolide avec neuf rats.
Le groupe sous traitement par Uncaria tomentosa (groupe Uncaria) a révélé des follicules immatures (tableau 1 et figure 1) dans neuf cas (90%), et les follicules avec une maturation complète et mature corpus luteum (Tableau 2) est présent dans un cas (10%).
L’histologie utérine (tableau 3) a montré un endomètre faiblement prolifératif (figure 2) dans neuf échantillons (90 %).
Le placebo groupe avait des follicules avec une maturation complète et un corps jaune mature dans tous les cas (100%). En ce qui concerne l’endomètre, il était prolifératif dans huit cas (80%).
Le groupe leuprolide avait des follicules immatures dans tous les échantillons et un corps jaune atrophié dans huit échantillons (88%). L’endomètre était atrophié (Figure 3) dans deux cas (22,2%), et faiblement prolifératif dans sept cas (77,8%).
Discussion
Des études avec des données cliniques et expérimentales sur l’utilisation d’herbes médicinales pour traiter l’endométriose, ont rapporté que plusieurs médicaments aux propriétés anti-inflammatoires, analgésiques, immunomodulatrices et antioxydantes sont efficaces dans la lutte contre cette maladie. De nouvelles études cliniques sur l’efficacité des herbes sont nécessaires pour le traitement de l’endométriose chez la femme13. En ce sens, le guide des preuves pour le diagnostic et le traitement de l’endométriose mené par la Société européenne de reproduction humaine et d’embryologie, considère un degré de recommandation de grade D pour l’utilisation d’herbes médicinales dans le traitement de l’endométriose, c’est-à-dire qu’il n’y a aucune preuve pour soutenir ces traitements, mais cette société recommande que les médicaments à base de plantes ne soient pas jetés, car certaines femmes qui utilisaient ces herbes ont remarqué une diminution de la douleur et une amélioration de la qualité de vie. De plus, nous avons le fait que la griffe de chat a déjà autorisé son utilisation par des institutions comme la FDA (Food and Drug Administration) comme complément alimentaire.
La connaissance de l’endométriose sur la physiopathologie avec des changements inflammatoires, apoptotiques , immunomodulateurs et antioxydants, a donné la base à l’utilisation de médicaments, expérimentalement, qui possèdent des mécanismes d’action avec des effets indésirables de ces changements mentionnés ci-dessus. Une étude expérimentale utilisant cet extrait a montré une réduction significative de la concentration endométriale9.
Une fois établi que le la griffe de chat réduit l’endométriose expérimentalement, il est nécessaire d’évaluer le mécanisme d’action d’Uncaria tomentosa pour le traitement de cette pathologie. Parmi les médicaments couramment utilisés pour traiter l’endométriose se trouvent les contraceptifs, dont l’action est connue contre l’endométriose. Dans l’évaluation, la culture in vitro du tissu tumoral mammaire (carcinome canalaire infiltrant, stade II et mal différencié) a été utilisée Uncaria tomentosa et comparée au méthotrexate, où il a été observé une diminution de la zone spécifique des récepteurs aux œstrogènes provoquée par cette phytothérapie, qui attribue une action contraceptive pour Uncaria tomentosa 15. Sur la base de cette prémisse est devenue nécessaire pour évaluer l’effet contraceptif de la griffe de chat.
Le paramètre histologique choisi pour évaluer les effets contraceptifs a été fait sur la base d’une étude qui a examiné l’utilisation de médroxy-progestérone intramusculaire chez le rat à différentes doses, suivie d’une analyse histologique des ovaires et de la couche épithéliale de l’utérus de l’échantillon 12. Ils ont été organisés en trois groupes, témoins expérimentaux, positifs et négatifs. Le groupe expérimental (groupe Uncaria) a utilisé 32 mg / jour d’extrait d’Uncaria tomentosa et le groupe témoin négatif (groupe placebo) ont utilisé quotidiennement 1 ml de solution saline à 0,9% sur la base de Neto e t al.9, qui a montré une réduction significative de l’endométriose sans complications cliniques apparentes. Le groupe témoin positif (groupe leuprolide) a reçu de l’acétate de leuprolide 1 mg / kg de poids corporel en dose unique sous-cutanée, sur la base d’Oktem et al.11, qui ont évalué l’utilisation d’une dose élevée d’atorvastatine sur l’endométriose expérimentale avec des résultats satisfaisants11. L’acétate de leuprolide est un analogue de la GnRH, qui donne d’excellents résultats chez les femmes atteintes d’endométriose, mais son utilisation est limitée en raison d’effets secondaires, principalement caractérisés par une perte osseuse et des troubles climatériques14.
L’analyse histologique des ovaires a montré des changements similaires dans les groupes uncaria et leuprolide, montrant une absence d’atrophie du corps jaune et des follicules ovariens primaires, dans la plupart des échantillons, ce qui suggère l’absence d’activité ovarienne. Lors de l’évaluation histologique de la couche épithéliale utérine, les groupes Uncaria et leuprolide ont de nouveau réalisé des performances similaires, leurs échantillons présentant des couches épithéliales faiblement prolifératives, contrairement à celui observé dans le groupe placebo avec tous leurs échantillons en phase proliférative. Ces données selon Mukherji et Bhowmik12 sont compatibles avec la contraception.
Conclusion
Compte tenu des résultats histopathologiques chez les rats atteints d’endométriose expérimentale exposés à l’extrait d’Uncaria tomentosa et comparés aux témoins positifs et négatifs groupes, nous suggérons que les changements trouvés sont compatibles avec la contraception.
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Conflit d’intérêts: aucun
Source financière: aucune