Introduction
La transformation est le processus d’introduction d’ADN étranger (p. ex. plasmides, BAC) dans une bactérie. Les cellules bactériennes dans lesquelles l’ADN étranger peut être transformé sont appelées compétentes. Certaines bactéries sont naturellement compétentes (par exemple B. subtilis), tandis que d’autres comme E. coli ne sont pas naturellement compétentes. Les cellules non compétentes peuvent être rendues compétentes puis transformées via l’une des deux approches principales; transformation chimique et électroporation.
Les deux méthodes de transformation présentent des avantages et des inconvénients. En général, la transformation chimique est moins sujette aux erreurs et plus rapide, mais l’électroporation produit une efficacité de transformation plus élevée (fraction de cellules transformées qui absorbent réellement l’ADN étranger). Voir Clonage pour une discussion plus complète des deux approches.
Protocoles
OpenWetWare a déjà un certain nombre de protocoles relatifs à la transformation bactérienne, mais d’autres sont toujours les bienvenus.
Si vous utilisez une variante sur l’un de ces protocoles, n’hésitez pas à ajouter un lien vers votre protocole à partir de l’une de ces pages afin que les autres utilisateurs puissent trouver un protocole qui fonctionne pour eux. De plus, si quelqu’un utilise les protocoles à haute efficacité Innoe ou Hanahan, veuillez ajouter les protocoles ici.
Transformation chimique
Si vous prévoyez de faire une transformation chimique, vous devriez les voir pages –
- Préparation de cellules chimiquement compétentes
- Préparation du tampon TSS
- Transformation de cellules chimiquement compétentes
- Préparation de cellules chimiquement compétentes (Inoue )
- Transformer des cellules chimiquement compétentes (Inoue)
- TOP10 cellules chimiquement compétentes
Comparaison des tampons de transformation chimique
Quelqu’un devrait Découvrez les affirmations de Nishimura90. tk 08:58, 25 septembre 2007 (EDT)
Protocole de transformation du chlorure de rubidium ici
Quelqu’un devrait vérifier les allégations de compétence chimique 1e10 en utilisant des protocoles à 10% d’éthanol et de chlorure de calcium ici.
Électroporation
Si vous prévoyez d’utiliser l’électroporation, consultez ces pages –
- Cellules électrocompétentes
- Électroporation
Tous les résumés Medline: PubMed | HubMed