4 – MODELOS DE ARTIGO ORIGINAL BIOLÓGICO
Efeito contraceptivo de Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental1
Efeito anticoncepcional da Uncaria tomentosa (unha-de-gato) em ratas com endometriose experimental
João Nogueira NetoI; Frederico Lucas Lima Paiva CavalcanteII; Rafael Antonio Freire CarvalhoII; Taciana Gabrielle Pinheiro de Moura RodriguesII; Mariana Santana XavierII; Pablo Gustavo Ribeiro FurtadoIII; Eduardo SchorIV
Fellow Doutor pela Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) e Unidade de Endometriose e Laboratório Cirúrgico do HU-UFMA, Maranhão, Brasil. Elaborou o protocolo, envolveu os procedimentos técnicos, foi responsável pela redação do manuscrito, responsável pelo conteúdo intelectual e científico da pesquisa, supervisionou todas as fases da pesquisa, forneceu diretrizes para a intervenção cirúrgica
IIGraduanda da Universidade Federal do Maranhão (UFMA) , Brasil. Envolvido com procedimentos técnicos, responsável pela preparação do manuscrito
IIIMD, Departamento de Patologia, HU-UFMA, Maranhão, Brasil. Exames macroscópicos e histopatológicos
IVPhD, Professor Afiliado UNIFESP, São Paulo e Chefe da Unidade de Dor Pélvica e Endometriose da Escola Paulista de Medicina (EPM-UNIFESP), Brasil. Responsável pela aquisição e interpretação dos dados, auxiliado nos procedimentos técnicos, orientando as intervenções cirúrgicas
Correspondência
RESUMO
OBJETIVO: Avaliar as alterações histológicas no parênquima É a camada epitelial do útero e ovário de ratas com endometriose induzida, tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: 29 ratas com endometriose experimental, foram selecionadas e divididas em três grupos: O grupo uncaria recebeu 32mg / ml de extrato de Uncaria tomentosa, 1ml administrado diariamente e o grupo placebo recebeu 1ml de soro fisiológico 0,9% ao dia, durante 14 dias (ambos os grupos); o grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado em dose única subcutânea. No 15º dia de tratamento o corno uterino e os ovários foram retirados para análise histopatológica.
RESULTADOS: O grupo uncaria apresentou nove amostras (90%) com folículos ovarianos imaturos, enquanto o grupo placebo não apresentou nenhum caso e no grupo leuprolide havia oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, ocorrendo menos freqüentemente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino apresentou proliferação fraca em nove (90%) amostras do grupo uncaria, em dois (20%) animais do grupo placebo e sete (77,8%) ratas do grupo leuprolide.
CONCLUSÕES: Os achados sugerem que Uncaria tomentosa tem efeito contraceptivo.
Palavras-chave: Endometriose. Fitoterapia. Contracepção. Ratos.
RESUMO
OBJETIVO: Avaliação histológica do útero e parênquima ovariano de ratas com endometriose induzida tratadas com extrato de Uncaria tomentosa.
MÉTODOS: Foram selecionados 29 ratas com endometriose experimental e formados três grupos: O grupo uncaria completa extrato de Uncaria tomentosa com 32mg / ml, administrado 1ml ao dia e o grupo placebo introdução 1ml de solução salina a 0,9%, ambos por 14 dias; o grupo leuprolida adição de acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal vendido via subcutânea dose única. No 15 ° dia de tratamento realizado-se retirada de corno uterino e ovários para análise histopatológica.
RESULTADOS: O grupo uncaria apresentou nove (90%) com maturação incompleta dos folículos ovarianos, já o grupo placebo não apresentou nenhum caso e nenhum grupo leuprolida apresentou oito ratas (88%) com a mesma alteração. O grupo placebo apresentou corpo lúteo maduro em todos os animais, ocorrendo de forma menos freqüente nos grupos uncaria (10%) e leuprolida (22%). O epitélio uterino se mostra fracamente proliferativo em nove (90%) das contas do grupo unacaria, em dois (20%) casos do grupo placebo e sete (77,8%) casos no grupo leuprolida.
CONCLUSÃO: Os achados feito que a Uncaria tomentosa tem efeito anticoncepcional.
Descritores: Endometriose. Fitoterapia. Anticoncepção. Ratos.
Introdução
A endometriose é uma doença caracterizada pela presença de tecido que é estrutural e funcionalmente semelhante ao tecido endometrial fora da cavidade uterina, o que afeta a qualidade de vida e reprodutiva capacidade dos pacientes. Geralmente se desenvolve nos órgãos pélvicos, como peritônio, ovários, trompas de falópio, útero e fórnice de Douglas1,2.
A incidência de endometriose é tão alta quanto cerca de 10% das mulheres em idade reprodutiva. Essa patologia se comporta como uma doença responsiva ao estrogênio com atividades inflamatórias e imunomoduladoras, além de desequilíbrio da apoptose celular e estresse oxidativo2-5.
O tratamento da endometriose pode ser cirúrgico ou clínico, cuja terapêutica medicamentosa usual é aquela que interfere no ciclo menstrual normal induzindo pseudogravidez, pseudomenopausa ou anovulação crônica, proporcionando melhora clínica. Porém seus efeitos não são curativos, com recorrências frequentes, o que justifica a busca por novos tratamentos6.
A Uncaria tomentosa, popularmente conhecida como unha de gato, pertence à família das Rubiaceae, comumente encontrada em áreas tropicais de América do Sul e Central. Essa planta, na forma de extrato, é muito utilizada pelos indígenas e costuma ser utilizada como alternativa de tratamento para diversas doenças. Estudos têm demonstrado que a unha de gato possui propriedades antiinflamatórias, imunomoduladoras, pró-apoptóticas. e efeito antioxidante, bem como anticoncepcional, para justificar uma possível alternativa para o tratamento da endometriose7,8.
O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações histológicas na camada epitelial do parênquima do útero e ovariano de ratas com endometriose induzida, tratadas com extrato aquoso de Uncaria tomentosa (unha de gato).
Métodos
Este estudo experimental foi concluído entre abril e maio de 2011, com uma amostra de 40 ratos Wistar (Rattus norvegicus albinos) adultos, fêmeas, virgem, pesando entre 180 e 250 gramas, com 60 dias de idade, cedido pelo Biotério da Universidade Federal do Maranhão (UFMA).
A pesquisa foi realizada no Laboratório de Cirurgia Experimental do Hospital Universitário do Universidade Federal do Maranhão. Seguiu a legislação brasileira para o uso de animais de experimentação (Lei Arouca nº 11.794 / 2008) e as normas do Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA), instituição filiada ao International Council for Laboratory Animal Science. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal (CEEA-UEMA) sob o número de protocolo 011/2011.
Os animais foram agrupados cinco por gaiola de polipropileno com cobertura de grade de aço inoxidável, medindo 46 cm x 31 cm x 16 cm com fundo forrado com serragem, trocada a cada 48 horas. Os animais foram mantidos em condições ambientais constantes, recebendo ração para ratos (Purina®, São Paulo, Brasil) e água ad libitum por sete dias para adaptação, com controle de ruído, temperatura 22 ° C ± 2 ° C, umidade relativa 40% 60%, Ciclo claro / escuro de 12/12 horas.
A indução da endometriose foi realizada de acordo com a metodologia proposta por Nogueira Neto et al.9. Após 21 dias da primeira cirurgia, os ratos foram submetidos a nova cirurgia, momento em que foi feito o inventário da cavidade peritoneal com identificação e mensuração do foco de autotransplante com paquímetro digital, seguido do cálculo do volume pelo Sistema de Classificação de Graus de Implantes de crescimento de acordo com Quereda et al.10. Apenas aqueles que desenvolveram o nível de crescimento dois e três permaneceram no estudo.
Os ratos foram divididos aleatoriamente em três grupos. Cada animal foi marcado na cauda com escova permanente de quatro mm (Pilot®, São Paulo, Brasil) e as gaiolas foram identificadas. O início da gavagem foi a partir do 22º dia pós-cirúrgico da indução da endometriose.
Os grupos foram divididos da seguinte forma: o grupo Uncaria recebeu gavagem com 32 mg / ml de extrato de Uncaria tomentosa (Uncaria de gato 100mg, Herbário de Brasil), administrado 1ml por dia, e o grupo placebo recebeu gavagem diária com 1ml de soro fisiológico 0,9%, ambos por 14 dias segundo Nogueira Neto et al.9. O grupo leuprolida recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal (LupronTM 3, 75mg, ABBOTT do Brasil) dose única subcutânea11.
O fármaco experimental é composto por 16g de extrato de unha de gato (Uncaria tomentosa) e 500ml de solução salina 0,9%. O processamento foi feito triturando 160 comprimidos de 100mg de extrato de Unha de Gato (Unha de Gato 100 mg, Herbário do Brasil) em um almofariz de porcelana com pilão, e a seguir procedendo-se a dissolução do mesmo em 500 ml de NaCl 0,9% em um copo para misturar até ficar homogêneo. A mistura foi feita em um tempo médio de 15 minutos, e o volume total foi de 500ml em suspensão na concentração de 32mg / ml9.
Após o término do tratamento, nova cirurgia foi realizada e, neste momento , o inventário da cavidade peritoneal foi feito novamente. O corno uterino direito remanescente e ambos os ovários foram removidos para avaliação histológica. As peças retiradas foram limpas com soro fisiológico 0,9% e armazenadas em recipiente com formol tamponado a 10%, recebendo identificação e encaminhadas ao Departamento de Patologia do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão. Cortes de tecido foram feitos e corados com hematoxilina-eosina (HE).
Os animais de cada grupo foram mortos no 15º dia após o início do tratamento. Após o peso, eles receberam 150mg / kg de tiopental sódico (Thiopental®, Crystal, St. Paul) por via intraperitoneal.O medicamento foi diluído em igual volume de soro fisiológico, conforme resolução nº 714, de 20 de junho de 2002, do Conselho Federal de Medicina Veterinária (CFMV). O óbito foi caracterizado por parada cardiorrespiratória e ausência completa de reflexos.
A análise dos dados foi descritiva, com base nos achados histológicos de Mukherji e Bhowmik12.
Resultados
Da amostra inicial de 40 ratas, dez foram excluídas por não desenvolverem endometriose graus dois e três e uma por aspiração durante gavagem. A amostra final foi composta por 29 ratos, sendo divididos em três grupos: uncaria e placebo, ambos com dez animais; e grupo leuprolide com nove ratos.
O grupo em tratamento com Uncaria tomentosa (grupo Uncaria) revelou folículos imaturos (Tabela 1 e Figura 1) em nove casos (90%), sendo os folículos com maturação completa e maduros corpus luteum (Tabela 2) está presente em um caso (10%).
A histologia uterina (Tabela 3) mostrou endométrio fracamente proliferativo (Figura 2) em nove amostras (90 %).
O placebo o grupo apresentava folículos com maturação completa e corpo lúteo maduro em todos os casos (100%). Em relação ao endométrio, este foi proliferativo em oito casos (80%).
O grupo leuprolida apresentou folículos imaturos em todas as amostras e corpo lúteo atrofiado em oito amostras (88%). O endométrio estava atrofiado (Figura 3) em dois casos (22,2%) e fracamente proliferativo em sete casos (77,8%).
Discussão
Estudos com dados clínicos e experimentais sobre o uso de ervas medicinais no tratamento da endometriose, relataram que vários medicamentos com propriedades antiinflamatórias, analgésicas, imunomoduladoras e antioxidantes são eficazes no combate a esta doença. Novos estudos clínicos sobre a eficácia das ervas são necessários para o tratamento da endometriose em mulheres13. Nesse sentido, o guia de evidências para o diagnóstico e tratamento de endometriose realizado pela Sociedade Europeia de Reprodução Humana e Embriologia, considera um grau de recomendação grau D para o uso de ervas medicinais no tratamento da endometriose, ou seja, não há evidências Para dar suporte a esses tratamentos, porém esta sociedade recomenda que os medicamentos fitoterápicos não sejam descartados, pois em algumas mulheres que usaram essas ervas foi notada diminuição da dor e melhora na qualidade de vida. Além disso, temos o fato de que a unha de gato já autorizou seu uso por instituições como o FDA (Food and Drug Administration) como suplemento alimentar.
O conhecimento da endometriose sobre fisiopatologia com alterações inflamatórias apoptóticas , imunomoduladores e antioxidantes, deram base ao uso de drogas, experimentalmente, que possuem mecanismos de ação com efeitos adversos dessas alterações mencionadas acima. Um estudo experimental utilizando este extrato mostrou redução significativa do foco endometrial9.
Uma vez estabelecido que o A unha de gato reduz a endometriose experimentalmente, é necessário avaliar o mecanismo de ação da Uncaria tomentosa para o tratamento desta patologia. Entre os medicamentos comumente usados no tratamento da endometriose estão os anticoncepcionais, com ação conhecida contra a endometriose. Na avaliação in vitro a cultura do tecido tumoral mamário (carcinoma ductal infiltrante, estágio II e pouco diferenciado) foi utilizado Uncaria tomentosa e comparado ao metotrexato, onde foi observada diminuição da área específica dos receptores de estrogênio causados por este fitoterápico, atributos uma ação contraceptiva para Uncaria tomentosa 15. Com base nesta premissa tornou-se necessário avaliar o efeito contraceptivo da unha de gato.
O parâmetro histológico escolhido para avaliar os efeitos contraceptivos foi feito com base em um estudo que examinou o uso de medroxi-progesterona intramuscular em ratas com diferentes doses, seguido da análise histológica dos ovários e da camada epitelial do útero da amostra12. Elas foram organizadas em três grupos, experimental, controle positivo e controle negativo. O grupo experimental (grupo Uncaria) fez uso 32mg / dia de extrato de Uncaria tomentosa e o grupo controle negativo (grupo Placebo) utilizou diariamente 1ml de soro fisiológico 0,9% à base de Neto e t al.9, que mostrou redução significativa da endometriose sem complicações clínicas aparentes. O grupo controle positivo (grupo leuprolida) recebeu acetato de leuprolida 1mg / kg de peso corporal aplicado em dose única subcutânea, baseado em Oktem et al.11, que avaliou o uso de atorvastatina em alta dose na endometriose experimental com resultados satisfatórios11. O acetato de leuprolida é um análogo do GnRH, que apresenta excelentes resultados em mulheres com endometriose, mas tem uso limitado devido aos efeitos colaterais, caracterizados principalmente por perda óssea e queixas climatéricas14.
A análise histológica dos ovários mostrou alterações semelhantes nos grupos uncaria e leuprolide, mostrando uma ausência de atrofia do corpo lúteo e folículos ovarianos primários, na maioria das amostras, o que sugere a ausência de atividade ovariana. Na avaliação histológica da camada epitelial uterina, os grupos Uncaria e leuprolide novamente apresentaram desempenho semelhante, com suas amostras apresentando camadas epiteliais fracamente proliferativas, ao contrário do observado no grupo placebo com todas as suas amostras na fase proliferativa. Esses dados segundo Mukherji e Bhowmik12 são compatíveis com contracepção.
Conclusão
Considerando os achados histopatológicos em ratas com endometriose experimental expostas ao extrato de Uncaria tomentosa e comparadas com controle positivo e negativo grupos, sugerimos que as alterações encontradas são compatíveis com a contracepção.
1. Sampson J. Endometriose peritoneal devido à disseminação menstrual de tecido endometrial na cavidade peritoneal. Am J Obstet Gynecol. 1927; 14: 442-69.
2. Banu SK, Starzinski-Powitz A, Speights VO, Burghardt RC, Arosh JA. Indução de endometriose peritoneal em camundongos nus com o uso de células epiteliais e estromais de endometriose imortalizadas humanas: uma ferramenta experimental potencial para estudar a patogênese molecular da endometriose em humanos. Fertil Steril. 2009; 91: 2199-209.
4. Braun PD, Ding J, Shen J, Rana N, Fernandez BB, Dmowski WP. Relação entre apoptose e o número de macrófagos no endométrio eutópico de mulheres com e sem endometriose. Fertil Steril. 2002; 78: 830-5.
6. Olive DL, Pritts AE. Tratamento da endometriose. N Engl J Med. 2001; 345: 266-75.
8. Kuras M, Nowakowska J, Sliwinska E, Pilarski R, Ilasz R, Tykarska T, Zobel A, Gulewicz K. Alterações na estrutura cromossômica, atividade mitótica e conteúdo de DNA nuclear de células de Allium Teste induzido por extrato de casca de água de Uncaria tomentosa (Wild ) DC. J Ethnopharmacol. 2006; 107: 211-21.
9. Nogueira Neto J, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, Araújo AG, Girão MJ, Schor E. Redução da endometriose experimental em ratos tratados com Uncaria tomentosa (unha de gato) Extrato Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2011; 154: 205-8.
10. Quereda F, Barroso J, Acien P. Efeitos individuais e combinados de triptorelina e gestrinona na endometriose experimental em ratos. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol.1996; 67: 35-40 .
12. Bhowmik T, Mukherjea M. Alterações histológicas no ovário e útero de rato após terapia contraceptiva injetável. Contracepção. 1988; 37: 529-38.
15. Salazar E, Jayme V. Depletion of Specific Binding Sites for Estrogen Receptor by Uncaria tomentosa. Proc Western Pharmacol Soc. 1998; 41: 123-4.
Conflito de interesse: nenhum
Fonte financeira: nenhum