Introdução
Transformação é o processo de introdução de DNA estranho (por exemplo, plasmídeos, BAC) em uma bactéria. As células bacterianas nas quais o DNA estranho pode ser transformado são chamadas de competentes. Algumas bactérias são naturalmente competentes (por exemplo, B. subtilis), enquanto outras, como E. coli, não são naturalmente competentes. As células não competentes podem ser tornadas competentes e então transformadas por meio de uma de duas abordagens principais; transformação química e eletroporação.
Existem vantagens e desvantagens em ambos os métodos de transformação. Em geral, a transformação química é menos sujeita a erros e mais rápida, no entanto, a eletroporação produz uma eficiência de transformação mais alta (fração de células transformadas que realmente absorvem o DNA estranho). Consulte Clonagem para uma discussão mais completa de ambas as abordagens.
Protocolos
O OpenWetWare já tem vários protocolos relacionados à transformação bacteriana, mas mais são sempre bem-vindos.
Se você usa uma variante em um desses protocolos, sinta-se à vontade para adicionar um link para o seu protocolo em uma dessas páginas para que outros usuários possam encontrar um protocolo que funcione para eles. Além disso, se alguém usar os protocolos de alta eficiência Innoe ou Hanahan, adicione os protocolos aqui.
Transformação química
Se você planeja fazer uma transformação química, deve ver estes páginas –
- Preparação de células quimicamente competentes
- Preparação de tampão TSS
- Transformação de células quimicamente competentes
- Preparação de células quimicamente competentes (Inoue )
- Transformando células quimicamente competentes (Inoue)
- TOP10 células quimicamente competentes
Comparação do tampão de transformação química
Alguém deveria verifique as reivindicações de Nishimura90. tk 08:58, 25 de setembro de 2007 (EDT)
Protocolo de transformação de cloreto de rubídio aqui
Alguém deve verificar as afirmações de competência química 1e10 usando protocolos de etanol a 10% e cloreto de cálcio aqui.
Eletroporação
Se você planeja usar eletroporação, consulte estas páginas –
- Células eletrocompetentes
- Eletroporação
Todos os resumos do Medline: PubMed | HubMed